インフルエンザウイルスRNA合成反応を制御する宿主因子RAF-2p48の機能解析

控制流感病毒RNA合成反应的宿主因子RAF-2p48的功能分析

基本信息

批准号：
15790241
负责人：
百瀬文隆
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

インフルエンザウイルスゲノムからのRNA合成を促進する宿主因子画分RAF(RNA Polymerase Activating Factor)-2には、ウイルス核タンパク質NP(Nucleocapsid Protein)に対し酸性分子シャペロンとして機能するp48と、RNA認識・結合に関わると予想されるp36が存在する。昨年度の成果より組換え体p48を単独で発現・精製すると多量体化する事が判明したが、RAF-2画分においてp48は多量体化しておらずp36とのヘテロ2量体として存在する。実際、p36上の特定領域にp48が結合する事を証明し、欠損変異体を用いた試験管内および細胞内での解析によって20アミノ酸程度の領域まで結合部位を狭めることに成功した。また、p48はアミノ酸配列上RNA巻き戻し酵素として機能すると推定されているが、どのような標的2本鎖RNAをもちいてもp48単独では有意な巻き戻し滑性を見出すことができなかった。p36の特性を考え合わせ、p48が本来の活性を示すためにはp36のようなRNA結合補助因子を必要とする可能性が考えられる。p36がモデルウイルスゲノムの特定領域に対して優先的に結合する事が明らかと成ったことから、感染細胞内においてウイルスゲノムRNA認識に関与する可能性が示唆された。また、p36がNPとも相互作用しうることが判明し、この相互作用にp36のカルボキシル末端ドメインが関与する事が判明した。このドメインはp48結合部位とは異なることから、p48・p36・NP・ウイルスRNAの4者複合体と成り得ることが判明した。さらに、p36は試験管内においてNP-モデルウイルスRNA複合体形成を促進する活性を持つことが見出された。これらの成果より、p36はp48-NP複合体をウイルスRNA上へと導く役割を担っていると考えられる。

RAF（RNA聚合酶激活因子）-2是一种促进流感病毒基因组RNA合成的宿主因子组分，含有p48，其作为病毒核蛋白NP（核衣壳蛋白）的酸性分子伴侣，与RNA识别和结合。是p36，预计会涉及到。去年的结果表明，当重组p48单独表达和纯化时，它会发生多聚化，但在RAF-2级分中，p48并未发生多聚化，而是与p36以异二聚体形式存在。事实上，他们证明p48与p36上的特定区域结合，并且通过使用缺失突变体的体外和细胞内分析，他们成功地将结合位点缩小到约20个氨基酸的区域。此外，根据其氨基酸序列，推测p48具有RNA解旋酶的功能，但无论使用哪种靶双链RNA，单独使用p48都没有发现显着的解旋滑动特性。考虑到 p36 的特性，p48 可能需要 RNA 结合辅因子（例如 p36）才能发挥其原始活性。已经清楚的是，p36 优先与模型病毒基因组的特定区域结合，表明它可能参与受感染细胞内的病毒基因组 RNA 识别。还发现p36也可以与NP相互作用，并且p36的羧基末端结构域参与这种相互作用。由于该结构域与p48结合位点不同，因此发现它可以形成p48、p36、NP和病毒RNA的四方复合物。此外，p36被发现具有体外促进NP模型病毒RNA复合物形成的活性。这些结果表明 p36 在将 p48-NP 复合物引导到病毒 RNA 上发挥着作用。