アルコールオキシダーゼアイソザイムを用いた酵母の新規異種遺伝子発現系の開発

使用乙醇氧化酶同工酶开发新型酵母异源基因表达系统

基本信息

批准号：
15780061
负责人：
中川智行
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではメチロトローフ酵母Pichia methanolicaが持つ2つのAOD遺伝子を利用することにより、より強力で、同一環境下で発現量比・発現時期の調節可能な複数の有用タンパク質の発現を自在にコントロールできる新たな分子生物学の研究ツールの開発を目指しており、本研究ではAODアイソザイムの発現制御機構の解明からP.methanolica新規異種遺伝子発現系の開発を目的としている。・本年度の研究内容および成果・MOD1およびMOD2プロモーターを用いた発現系の開発MOD2プロモーターを用いた異種遺伝子発現系を開発した。MOD2プロモーターとMOD1ターミネーター、さらにはPmADE2をマーカー遺伝子とした発現ベクターを構築し、出芽酵母PHO5をレポーター遺伝子としてMOD2プロモーター支配下に挿入し、P.methanolica ade2^-株に形質転換した。MOD1プロモーターを用いた発現ベクターはpMETB (Invitrogen)を用いた。その結果、MOD2プロモーター支配下でメタノールにより十分なAP活性が認められ、MOD2プロモーターを用いた発現系を構築することができた(1)。また、MOD1プロモーターとMOD2プロモーターの発現パターンは、昨年度の研究成果であるMOD1およびMOD2の発現制御パターンと同様であり、今回開発できたMOD2発現系と、すでに開発されているMOD1発現系との組み合わせによる様々な有用タンパク質の発現生産に結びつけられるものと確信している。(1)稲垣篤史ら,2004.メチロトローフ酵母Pichia methanolicaのアルコールオキダーゼアイソザイムを用いた新たな異種遺伝子発現系の開発.日本生物工学会平成16年度大会

在本研究中，通过利用甲基营养酵母甲醇毕赤酵母拥有的两个AOD基因，我们开发了一种更强大的新方法，使我们能够自由控制多种有用蛋白的表达，这些蛋白的表达比例和表达时间可以在我们的目标是开发分子生物学的研究工具，本研究旨在阐明AOD同工酶的表达控制机制并开发新型甲醇异源基因表达系统。・今年的研究内容和结果・使用MOD1和MOD2启动子的表达系统的开发我们开发了使用MOD2启动子的异源基因表达系统。我们利用MOD2启动子、MOD1终止子和PmADE2作为标记基因构建了表达载体，在MOD2启动子的控制下插入酿酒酵母PHO5作为报告基因，并将其转化到P.methanolica ade2^-菌株中。使用pMETB(Invitrogen)作为使用MOD1启动子的表达载体。结果，在 MOD2 启动子的控制下，用甲醇观察到足够的 AP 活性，并且我们能够使用 MOD2 启动子构建表达系统 (1)。另外，MOD1启动子和MOD2启动子的表达模式与MOD1和MOD2的表达控制模式相似，这是去年的研究结果，而这次开发的MOD2表达系统和MOD1表达系统的结合我们相信这将导致各种有用蛋白质的表达和生产。 (1) Atsushi Inagaki 等人，2004 年。利用来自甲基营养酵母甲醇毕赤酵母的醇氧化酶同工酶开发新的异源基因表达系统。日本生物工程学会 2004 年年会。