新しい血液凝固制御因子ADAMTS-13の構造と機能に関する研究

新型凝血调节剂ADAMTS-13的结构与功能研究

• 批准号: 15770093
• 负责人: 小亀 浩市
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770093/
• 关键词: 血液; 凝固因子; 血小板; ADAMTS-13; フォンビルブランド因子; 血栓性血小板減少性紫斑病; 蛋白質分解; 酵素

ADAMTS-13は、フォンビルブランド因子(VWF)を切断することでVWFの血小板凝集能を調節する酵素である。ADAMTS-13活性の欠損は血栓性血小板減少性紫斑病(TTP)を引き起こす。本研究は、ADAMTS-13の構造と機能を解析し、臨床的に役立つ知見を得ることを目的とした。【ADAMTS-13活性測定法の開発】初年度に、ADAMTS-13の特異的基質として機能する最短ペプチドを同定し、これを利用した組換えタンパク質による活性測定法を開発した。今年度は、蛍光基で修飾した化学合成ペプチド基質を開発し、より簡便に測定できる系を確立した。【ADAMTS-13活性の分布調査】開発した蛍光測定法を用い、種々の患者および地域一般住民の血漿ADAMTS-13活性を測定した。従来の報告と同様、TTP患者ではADAMTS-13活性が著減していたが、類似症状を示す溶血性尿毒症症候群患者では正常範囲内の活性が検出された。また、ADAMTS13活性は加齢と共に低下すること、男性より女性の方が有意に高いことが明らかになった。【VWF切断部位認識抗体の作製】初年度、ADAMTS-13で切断されたVWFのC末端断片のN末端を特異的に認識するモノクローナル抗体の作製を試みたが、目的のクローンは得られなかった。そこで今年度は、N末端断片のC末端に対する抗体の作製を試みたが、やはり成功しなかった。本計画を成功させるには、より工夫した戦略が必要なのかもしれない。【ADAMTS-13ノックアウトマウスの解析】初年度から作製し始めていたADAMTS-13ノックアウトマウスが完成した。血漿のADAMTS-13活性は予想通り検出限界未満であり、超高分子量VWFマルチマーの存在も確認できた。しかし、少なくとも通常飼育下ではTTP様の症状を示さなかった。このことは、ヒトとマウスにおいてADAMTS-13への依存度が異なる可能性、あるいは、ヒトにおいてもTTP発症にADAMTS-13以外の要因が関与している可能性を示唆している。本研究によって、今後のADAMTS-13研究の発展に結びつく重要な成果が得られたものと考えられる。

ADAMTS-13 是一种通过裂解血管性血友病因子 (VWF) 来调节血小板聚集能力的酶。 ADAMTS-13 活性缺陷会导致血栓性血小板减少性紫癜 (TTP)。本研究旨在分析ADAMTS-13的结构和功能并获得临床有用的知识。 [开发 ADAMTS-13 活性测定方法] 第一年，我们鉴定了作为 ADAMTS-13 特异性底物的最短肽，并开发了使用该肽的重组蛋白测定活性的方法。今年，我们开发了一种用荧光基团修饰的化学合成肽底物，并建立了一个更容易测量的系统。 [ADAMTS-13活性分布的调查] 使用开发的荧光测量方法测量了不同患者和当地居民的血浆ADAMTS-13活性。与之前的报道一样，ADAMTS-13活性在TTP患者中显着降低，但在具有类似症状的溶血性尿毒症综合征患者中检测到活性在正常范围内。研究还表明，ADAMTS13 活性随着年龄的增长而降低，并且女性中的活性显着高于男性。 [识别VWF切割位点的抗体的制备] 第一年，我们尝试生产特异性识别ADAMTS-13切割的VWF C端片段的N端的单克隆抗体，但未能获得所需的克隆。因此，今年，我们尝试生成针对N端片段的C端的抗体，但我们再次没有成功。可能需要更复杂的策略才能使该计划取得成功。 【ADAMTS-13基因敲除小鼠分析】 从第一年开始生产的ADAMTS-13基因敲除小鼠已经完成。正如预期的那样，血浆中的 ADAMTS-13 活性低于检测限，并且还证实了超高分子量 VWF 多聚体的存在。然而，至少在正常圈养下，它们并没有表现出类似TTP的症状。这表明人类和小鼠可能对 ADAMTS-13 有不同程度的依赖，或者 ADAMTS-13 以外的因素也可能参与人类 TTP 的发育。相信这项研究取得了重要成果，将引领未来ADAMTS-13研究的发展。

项目成果

Differential contributions of ATF6 and XBP1 in activating endoplasmic reticulum stress-responsive cis-acting elements ERSE, UPRE and ERSE-II.

ATF6 和 XBP1 在激活内质网应激反应顺式作用元件 ERSE、UPRE 和 ERSE-II 中的不同贡献。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biochem. 136(3)
• 作者: Tomohiko Okuda;Sic L.Chan;Fumiaki Banno;Keisuke Yamamoto
• 通讯作者: Keisuke Yamamoto

フォンビルブランド因子切断酵素の特異的基質および活性測定法

冯维勒布兰德因子裂解酶的特异性底物和活性测定

• 发表时间: 2002

Koichi Kokame: "Genetic defects leading to hereditary thrombotic thrombocytopenic purpura."Semin.Hematol.. 41(1). 34-40 (2004)

Koichi Kokame：“遗传缺陷导致遗传性血栓性血小板减少性紫癜。”Semin.Hematol.. 41(1)。

Tomohiko Okuda: "Ndrg1-deficient mice exhibit progressive demyelinating disorder of peripheral nerves."Mol.Cell.Biol.. in press.

Tomohiko Okuda：“Ndrg1 缺陷小鼠表现出进行性周围神经脱髓鞘疾病。”Mol.Cell.Biol.. 正在出版。

Identification of strain-specific variants of mouse Adamtsl3 gene encoding von Willebrand factor-cleaving protease.

编码冯维勒布兰德因子裂解蛋白酶的小鼠 Adamtsl3 基因的品系特异性变体的鉴定。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biol.Chem. 279(29)
• 作者: Tomohiko Okuda;Sic L.Chan;Fumiaki Banno
• 通讯作者: Fumiaki Banno