小胞体ストレス応答性新規蛋白質Herp及びRTPに関する研究

新型内质网应激反应蛋白Herp和RTP的研究

• 批准号: 11153231
• 负责人: 小亀 浩市
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153231/
• 关键词: 血栓症; ホモシステイン; 血管内皮細胞; 遺伝子発現; 小胞体ストレス; 分子シャペロン; RTP; Herp

血栓症の危険因子として、高ホモシステイン血症が知られている。近年私達は、血管内皮細胞のホモシステイン刺激及び小胞体ストレス負荷で発現量が増加する新規蛋白質Herp及びRTPを発見した。そこで本研究は、「小胞体ストレス応答機構の解明」「両蛋白質の機能探索」「高ホモシステイン血症の病態発症機序解明」を主目的として計画された。以下に成果を列記する。【Herp及びRTPの転写調節機構】レポータージーンアッセイによって、Herp遺伝子においても既知の小胞体ストレス応答シスエレメントERSEが機能していること、さらに新規エレメントERSE-IIも関与していることを見出した。両エレメントが相加的に働くらしい。一方、RTP遺伝子にはいずれの配列も存在せず、別のエレメントあるいは転写以外の段階で発現調節されている可能性が示唆された。【Herpの小胞体局在】Herpは、他の小胞体ストレス蛋白質と異なり、小胞体膜に局在する。そのトポロジーを解析すると、分子の大部分が細胞質に露出していることが明らかになった。これは、Herpが小胞体内腔の蛋白質に対してシャペロン様活性を発揮しない可能性を示す。【RTP相互作用蛋白質の同定】酵母Two-Hybird系を利用してRTP相互作用蛋白質の同定を試みたが、陽性クローンは得られなかった。【RTPのリン酸化】RTPのリン酸化残基を特定するため、多くのRTP変異体発現ベクターを構築した。現在、解析進行中である。【高ホモシステイン血症と小胞体ストレス】高ホモシステイン血症患者の繊維芽細胞におけるHerp、RTP、GRP78量を正常群と比較したところ、病態差よりも個体差が大きかった。【Herpノックアウトマウス作成準備】マウスHerpの遺伝子構造を調べ、Herp欠損マウス作成用ベクターを構築した。現在、ES細胞のスクリーニング中である。以上の成果を基盤に研究を進め、Herp及びRTPの生理機能や病態との関連解明を目指す。

高同型半胱氨酸血症被认为是血栓形成的危险因素。近年来，我们发现了新的蛋白质Herp和RTP，它们的表达水平在同型半胱氨酸刺激血管内皮细胞和内质网应激负荷时增加。因此，本研究的主要目标是“阐明内质网应激反应机制”、“探索两种蛋白质的功能”、“阐明高同型半胱氨酸血症的病理机制”。结果如下所示。 【Herp和RTP的转录调控机制】通过报告基因检测，我们发现已知的内质网应激反应顺式元件ERSE在Herp基因中发挥作用，并且还涉及一个新的元件ERSE-II。这两个元素似乎是相加的。另一方面，RTP 基因中不存在这两个序列，这表明表达可能受到另一个元件的调节或在转录以外的阶段调节。 [Herp的内质网定位] 与其他内质网应激蛋白不同，Herp定位于内质网膜。对其拓扑结构的分析表明，该分子的大部分暴露在细胞质中。这表明 Herp 可能不会在内质网腔中的蛋白质上发挥分子伴侣样活性。 [RTP相互作用蛋白的鉴定] 我们尝试使用酵母Two-Hybird系统鉴定RTP相互作用蛋白，但没有获得阳性克隆。 [RTP的磷酸化] 为了鉴定RTP的磷酸化残基，我们构建了许多RTP突变体表达载体。目前分析正在进行中。 【高同型半胱氨酸血症与内质网应激】高同型半胱氨酸血症患者成纤维细胞中Herp、RTP、GRP78水平与正常组比较，个体差异大于病理情况差异。 【制备 Herp 敲除小鼠的准备】 我们研究了小鼠 Herp 的遗传结构，并构建了用于创建 Herp 缺陷小鼠的载体。目前，ES细胞正在筛选中。我们将根据上述结果继续研究，旨在阐明Herp和RTP之间的关系及其生理功能和病理状况。

项目成果

Chiemi Hine: "Monkey hepatocytes efficiently express tissue factor pathway inhibitor (TFPI), in contrast with human and rat hepatocytes"J. Biochem.. 125(6). 1039-1047 (1999)

Chiemi Hine：“与人类和大鼠肝细胞相比，猴肝细胞有效表达组织因子途径抑制剂 (TFPI)”J.

Kazuomi Kario: "Lipid-lowering therapy corrects endothelial cell dysfunction in a short time but does not affect hypercoagulable state even after long-term use in hyperlipidemic patients"Blood Coagul. Fibrinol.. 10(5). 269-276 (1999)

Kazuomi Kario：“降脂疗法可以在短时间内纠正内皮细胞功能障碍，但即使在高脂血症患者长期使用后也不影响高凝状态”凝血。

Xiang-An Li: "Cloning and characterization of a novel human gene encoding a zinc finger protein with 25 fingers"Biochim. Biophys. Acta. 1489. 405-412 (1999)

李翔安：“编码具有 25 个手指的锌指蛋白的新型人类基因的克隆和表征”Biochim。

Toshiyuki Sakata: "Prevalence of protein C deficiency in patien with cardiovascular problems in Japan"Thromb. Haemost.. 81(3). 466-467 (1999)

Toshiyuki Sakata：“日本心血管疾病患者中蛋白质 C 缺乏症的患病率”血栓。

Toshiyuki Sakata: "Age-and sex-related differences of plasma activated factor Vll levels in children"Thromb. Haemost.. 81(6). 910-912 (1999)

Toshiyuki Sakata：“儿童血浆活化因子 VII 水平的年龄和性别相关差异”血栓。