活性酸素によるシグナル伝達制御機構の解明

活性氧信号转导控制机制的阐明

基本信息

批准号：
03J07625
负责人：
真嶋隆一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

最近の研究から、マクロファージや樹状細胞の異常な活性化がこれらの炎症性疾患において重要であることが明らかにされてきた。特に菌体成分によるToll-like-receptor (TLR)の活性化がtriggerとなることが明らかにされている。TLRのシグナルはNF-kBの活性化を主体とするセリンスレオニンのリン酸化カスケードより成り立つ。一方TLRのシグナル系とJAK/STATを中心としたサイトカインシグナル系には密接なクロストークが存在し、互いに複雑に制御されている。サイトカインによってTLRシグナルは制御されるがその分子機構は不明である。我々はマクロファージ様M1細胞を用いてリポ多糖(LPS)+インターフェロン(IFN)_γで誘導される分子をマイクロアレイ解析で探索した.これらの中でTRAF6結合モチーフを有するFLN29に着目した.FLN29は腹腔マクロファージやマクロファージ用株細胞でIFNγないしIFNβ処理後にmRNAおよびタンパク質の発現上昇が見られた.しかしIL4やIL10では発現誘導は観察されなかった.NF_βレポーターアッセイの結果,FLN29はTLRシグナルを抑制することがわかった.FLN29は分子中央付近でTRAF6のTRAFドメインもしくはcoiled-coilドメインと結合し,293細胞でMyD88、TRIFおよびTRAF6依存的なNF_Bの活性化を抑制した.またRAW細胞のRNAiを用いたノックダウン細胞でLPS刺激時のI_B_リン酸化とTNF_産生亢進が確認された.FLN29はTLRシグナルの負のフィードバック調節因子あるいはIFNβの抗炎症作用を担う分子と考えられる.

最近的研究表明，巨噬细胞和树突状细胞的异常激活在这些炎症性疾病中很重要。特别是，已经揭示了细菌成分通过细菌成分激活Toll样受体（TLR）成为触发因素。 TLR信号由丝氨酸苏氨酸的磷酸化级联反应，主要基于NF-KB激活。另一方面，以JAK/STAT上为中心的TLR信号系统和细胞因子信号系统具有密切的串扰，并以复杂的方式进行控制。尽管细胞因子调节TLR信号，但它们的分子机制尚不清楚。我们使用巨噬细胞样的M1细胞来搜索脂多糖（LPS） +干扰素（IFN）_γ诱导的分子。其中，我们专注于具有TRAF6结合图案的FLN29。 FLN29在腹膜巨噬细胞和巨噬细胞细胞中IFNγ或IFNβ处理后显示出mRNA和蛋白质的表达增加。但是，在IL4或IL10中未观察到表达诱导。 NF_β报告基因测定法显示FLN29是TLR。发现它抑制了信号。 FLN29与中央分子附近的TRAF域或TRAF6的盘绕型结构域结合，在293个细胞中抑制了MyD88，TRIF和TRAF6依赖性NF_B激活。另外，在RAW细胞中，使用RNAi在敲低细胞中证实了I_B_磷酸化和LPS刺激后TNF_生产增加的增加。 FLN29被认为是TLR信号的负反馈调节因子或IFNβ的抗炎作用的分子。