モデル動物による好酸球性中耳炎の難治化と内耳障害の研究

难治性嗜酸性中耳炎及内耳疾病模型动物研究

基本信息

批准号：
22K16892
负责人：
工藤直美
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

プロテアーゼ刺激を利用した新規動物モデルの作成に取り組んだ。当初真菌プロテアーゼを用いることを想定していたが、文献上は植物性プロテアーゼであるパパインを用いて喘息モデルや好酸球性副鼻腔炎モデルを作成したという報告があった。好酸球性中耳炎モデルを作成するにあたっても、中耳刺激のためのプロテアーゼの至適投与量を考えるうえで参考にできる部分が多かったこともあり、今年度はパパインを用いたモデル動物作成を行う方針とした。ハートレー系モルモットの中耳腔にPBSで希釈したパパイン溶液を、経鼓膜的に投与するという方法でモデル動物を作成した。刺激の期間は12日間連続とし、最終投与から24時間以内に側頭骨を摘出し、標本を作製した。観察した結果、パパインの刺激を行った群では耳管鼓室口付近に好酸球を多数含む貯留物が観察され、その内部には脱落した杯細胞や呼吸上皮と思われるものも含まれていた。また、中耳粘膜上皮の直下にも好酸球の浸潤を認め、杯細胞の過形成も認められた。本研究は抗原非特異的な自然免疫系の反応を利用してモデル動物を作成する試みであり、このモデルから採取した中耳粘膜における2型自然リンパ球（ILC2）の探索も行った。ILC2は自然免疫反応においてTh2サイトカインの放出を促す役割を持ち、気管支喘息や好酸球性副鼻腔炎においてもその存在が報告されている。本研究ではILC2の表面に発現するマーカーの内、STR2、CRTH2、CD25の三種を蛍光免疫染色により検討し、これらを共発現する細胞をILC2と考えて探索したところ、パパイン刺激モデルにおいてこのような細胞が優位に増加していることが判明した。上記の方法で得られた好酸球性中耳炎モデル動物は、これまで行われていた卵白アルブミンの特異的抗原刺激を用いた方法よりも簡便であり、今後の病態研究に有用と考えらえる。現在英文誌への投稿準備中である。

我们致力于使用蛋白酶刺激创建新型动物模型。最初，假定使用真菌蛋白酶的使用，但文献报道说，植物蛋白酶是一种创建哮喘和嗜酸性鼻窦炎模型。在创建嗜酸性的中耳炎培养基模型时，考虑到中耳刺激的最佳蛋白酶剂量时，有许多领域可以用作参考，因此今年我们决定使用帕帕因创建一种模型动物。通过将用PBS稀释到Hartley Guinea Pigs的中耳腔中稀释的木瓜蛋白乳木瓜溶液来制备模型动物。连续12天进行刺激，并在最终给药后24小时内去除颞骨，并制备样品。观察结果表明，在被木瓜蛋白酶刺激的组中，在尤斯塔克塔克式管的口附近观察到大量嗜酸性粒细胞，在其中，它也包含叶细胞并被认为是呼吸道上皮。此外，嗜酸性粒细胞还直接在中耳上皮上下，并且还观察到杯状细胞的增生。这项研究试图使用抗原特异性的先天免疫系统反应来创建模型动物，并在此模型中收集的中耳粘膜中探索了2型天然淋巴细胞（ILC2）。 ILC2在促进先天免疫反应中Th2细胞因子的释放中起作用，并且还报道了其在支气管哮喘和嗜酸性鼻窦炎中的存在。在这项研究中，通过荧光免疫染色，STR2，CRTH2和CD25检查了在ILC2表面表达的三种类型的标记物，以及共表达这些标记的三种标记，这些细胞被探讨为ILC2，并发现这些细胞在帕帕因刺激模型中占主导地位。通过上述方法获得的嗜酸性粒细胞性中耳炎的动物模型比使用卵毛蛋白的特定抗原刺激的先前执行的方法更方便，并且被认为对未来的病理研究很有用。目前准备服从英语期刊。