細胞周期チェックポイントにおける癌抑制遺伝子LATS2キナーゼの機能解析

抑癌基因LATS2激酶在细胞周期检查点的功能分析

基本信息

批准号：
14780545
负责人：
薮田紀一
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者は、本研究課題において以下のような成果を挙げた。(1)Lats2キナーゼが中心体に局在することを明らかにし、Lats2を特異的にリン酸化するプロテインキナーゼの一つとして中心体キナーゼであるAurora-Aを同定した。(2)Aurora-Aによってリン酸化されるLats2の83番目のセリン残基(S83)は、間期(Interphase)では核内と中心体の両方でリン酸化され、核膜崩壊後は、中心体でのみリン酸化された。また、CytokinesisのときのS83のリン酸化は中心体から消失し、その代わりにMidbodyにおいて強く観察された。(3)S83の非リン酸化型変異体S83CをHeLa細胞に導入してLats2の中心体局在を観察した結果、S83Cを発現させた細胞でLats2の中心体局在率が顕著に低下したことから、Aurora-AによるS83のリン酸化がLats2の中心体局在に重要な役割を果たしていることを明らかにした。(4)個体レベルにおけるLATS2の生理的機能を明らかにするために、LATS2ノックアウト(KO)マウスの作製を行なった。その過程でヘテロ欠損マウス(LATS2^<+/->)は正常に生育したが、ホモ欠損マウス(LATS2^<-/->)は胎生致死であることがわかった。さらに、(LATS2^<-/->)の胎児由来線維芽細胞(MEF)では、細胞増殖速度の増加と中心体の過剰増幅、スピンドルの異常が認められた。これらの結果は、Lats2が中心体の複製・成熟と正常なスピンドルの形成に関与して細胞増殖を負に制御していることを示唆している(投稿準備中)。以上のように、本研究ではLats2がAurora-Aにより細胞周期依存的なリン酸化を受けて中心体およびスピンドルの制御因子として機能していることを明らかにした。

申请人在该研究主题中实现了以下结果：（1）我们发现LATS2激酶位于中心体上，并确定中心体激酶Aurora-A是特定磷酸化LATS2的蛋白激酶之一。（2）在间隙期间和核破坏后，由Aurora-A磷酸化的LATS2的第83丝氨酸残基（S83）在核和中心体中磷酸化，仅在中心体上磷酸化。此外，细胞因子过程中S83的磷酸化从中心体消失了，而是在中体中强烈观察到。 (3) We observed the centrosomal localization of Lats2 by introducing a non-phosphorylated mutant S83C into HeLa cells, and as a result, the centrosomal localization of Lats2 was significantly reduced in cells expressing S83C, and thus revealed that S83 phosphorylation by Aurora-A plays an important role in the centrosomal localization of Lats2. （4）为了阐明在单个水平上LATS2的生理功能，产生了LATS2敲除（KO）小鼠。在此过程中正常生长，杂质小鼠（LATS2^<+/->），但是均缺陷的小鼠（LATS2^< - / - >）被发现对胚胎寿命具有致命性。此外，在（LATS2^< - / - >）的胎儿成纤维细胞（MEF）中，观察到细胞增殖速率的增加，过度的中心体扩增和异常纺锤体。这些结果表明，LATS2通过参与中心体复制和成熟以及正常的纺锤体形成（为发布准备）来负调节细胞增殖。如上所述，这项研究表明，LATS2经历了Aurora-A的细胞周期依赖性磷酸化，并且是中心体和纺锤体的调节剂。