癌抑制遺伝子LATS2キナーゼのM期チェックポイントにおける役割の研究

抑癌基因LATS2激酶在M期检查点中的作用研究

基本信息

批准号：
14033225
负责人：
薮田紀一
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者は、分裂(M)期チェックポイント制御におけるLats2キナーゼの機能解析を行ってきた。その過程においてLats2が微小管重合阻害剤ノコダゾールで処理した際に特異的なリン酸化制御を受けていることを見つけ、このリン酸化を制御するプロテインキナーゼの一つとして中心体キナーゼであるAurora-Aを同定した。さらに、Aurora-AがLats2の83番目のセリン残基(S83)をリン酸化することを見出した。S83は間期(Interphase)では核内と中心体の両方でリン酸化され、核膜崩壊後は、中心体でのみリン酸化された。特に、そのリン酸化シグナルはProphaseとMetaphaseで強く観察され、このパターンはAurora-Aと酷似している。また、非常に興味深いことに、CytokinesisのときのS83のリン酸化シグナルは中心体から消失し、その代わりにMidbodyにおいて強く観察された。S83が中心体でリン酸化されていたことから、申請者はS83のリン酸化がLats2の中心体局在に影響を及ぼしているのではないかと考え、Lats2の野生型と2つのS83変異体S83C、S83EをHeLa細胞に導入し、その中心体局在を観察した。その結果、S83Cを発現させた細胞では、Lats2の中心体局在率が顕著に低下した(印刷中)。このことは、Aurora-AによるS83のリン酸化がLats2の中心体局在に重要な役割を果たしていることを示唆している。Lats2は中心体に局在することで他の中心体構成蛋白質を効率よくリン酸化して中心体の成熟あるいはスピンドルの形成を厳密に制御していると考えられる。実際、申請者は、S83を含むLats2のN末端領域がもう一つのLatsファミリーで中心体などの分裂装置上に局在することが報告されているLats1のC末端領域と結合することを見つけている。(投稿準備中)。

申请人一直在分析Lats2激酶在控制有丝分裂(M)期检查点中的功能。在此过程中，我们发现当用微管聚合抑制剂诺考达唑处理时，Lats2 受到磷酸化的特异性调节，并且我们发现 Aurora-A（一种中心粒激酶）是控制这种磷酸化的蛋白激酶之一。此外，我们发现 Aurora-A 磷酸化 Lats2 的第 83 个丝氨酸残基（S83）。 S83在间期在细胞核和中心体均被磷酸化，核膜破裂后仅在中心体被磷酸化。特别是，在前期和中期观察到强烈的磷酸化信号，这种模式与Aurora-A非常相似。此外，非常有趣的是，胞质分裂期间的 S83 磷酸化信号从中心体消失，而是在中体中强烈观察到。由于S83在中心体被磷酸化，申请人认为S83磷酸化可能会影响Lats2的中心体定位，申请人确定将Lats2野生型和两个S83突变体S83C、S83E导入HeLa细胞中并观察其中心体定位。结果，在表达 S83C 的细胞中，Lats2 的中心体定位率显着降低（出版中）。这表明 Aurora-A 对 S83 的磷酸化在 Lats2 的中心体定位中发挥重要作用。通过定位于中心体，Lats2 被认为可以有效磷酸化其他中心体构成蛋白，并严格控制中心体成熟或纺锤体形成。事实上，申请人发现Lats2的N端区域（包括S83）与Lats家族的另一个成员Lats1的C端区域结合，据报道Lats1位于分裂装置如中心体上。是。（准备发帖）。