トランスポーターを介した薬物輸送の予測法の確立:薬効・副作用に関わる組織送達性の定量的制御

建立预测转运体药物转运的方法：定量控制与药效和副作用相关的组织递送

基本信息

批准号：
14704057
负责人：
楠原洋之
金额：
$ 7.32万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

上皮細胞における薬物のベクトル輸送について、特に有機アニオン系化合物の尿細管分泌に焦点を当てた検討を進めた。極性細胞(LLC-PK1細胞)にラット腎取り込みに関与するOAT3、マウスRSTを共発現させた。LLC-PK1細胞ではOat3は側底膜に、RSTは頂側膜に局在した。種々有機アニオンの本細胞における経細胞輸送を定量化した。p-aminohippurateや2,4-dichlorophenoxyacetateなどの低分子化合物についてはLLC-PK1細胞に内因性のトランスポーターが存在しているため、Oat3単独発現系で効率的な側底膜側から頂側膜側へのベクトル輸送が観察された。しかし、benzylpenicillinや尿酸については共遺伝子発現系でのみ側底膜側から頂側膜側へのベクトル輸送が観察された。これらの知見により、RSTは腎刷子縁膜において有機アニオンの排泄に関与することを明らかにした。また、本システムは有機アニオンの尿細管分泌を解析する上で有用である。刷子縁膜の他の有機アニオントランスポーターとして、ABCトランスポーターであるMRP4とBCRPについても、膜ベシクルを調製し、種々有機アニオンのベシクル内腔への取り込みを定量化した。その結果、両トランスポーターが広範な基質選択性を示すことを明らかにした。これらの結果から、有機アニオンの腎尿細管分泌には、複数のトランスポーターが関与していることが示唆された。

我们研究了上皮细胞中药物的载体转运，重点关注有机阴离子化合物的肾小管分泌。参与大鼠肾脏摄取的 OAT3 和小鼠 RST 在极化细胞（LLC-PK1 细胞）中共表达。在 LLC-PK1 细胞中，Oat3 定位于基底外侧膜，RST 定位于顶膜。我们量化了这些细胞中各种有机阴离子的转胞吞作用。对于低分子量化合物，如对氨基马尿酸盐和2,4-二氯苯氧基乙酸盐，LLC-PK1细胞中存在内源性转运蛋白，因此单独的Oat3表达系统可以有效地将它们从基底外侧膜侧转移到顶膜侧。观察到运输。然而，对于青霉素和尿酸，仅在同基因表达系统中观察到从基底外侧膜侧到顶膜侧的矢量转运。这些发现表明，RST 参与肾刷状缘膜中有机阴离子的排泄。该系统还可用于分析有机阴离子的肾小管分泌。为ABC转运蛋白MRP4和BCRP（刷状缘膜中的其他有机阴离子转运蛋白）制备膜囊泡，并对囊泡腔内各种有机阴离子的摄取进行定量。结果表明，两种转运蛋白均表现出广泛的底物选择性。这些结果表明多种转运蛋白参与肾小管有机阴离子的分泌。