肝・腎トランスポーターによる機能分担と活性調節に関する分子シンクロナイゼーション

肝肾转运蛋白功能划分和活性调节的分子同步

基本信息

批准号：
13022209
负责人：
楠原洋之
金额：
$ 2.62万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

1.肝・腎ふりわけのシンクロナイゼーション肝取り込みに働く有機アニオントランスポータ-(Oatp/OATP)の基質となるtemocaprilatやステロイドの硫酸抱合体やグルクロン酸抱合体は主に、Oat3により腎臓中へと取り込まれることが明らかになり、腎臓においてもamphipathicな有機アニオンの取り込みメカニズムが存在することが明らかとした。同じく側底膜側に局在するOat1は水溶性の低分子有機アニオンの種とした腎取り込みに関わることを明らかにした。排泄臓器の振り分けは、排泄・再吸収により決定されることが示唆された。尿細管を介した排泄は一部後述するRSTにより説明できると考えている。Oct1ノックアウトマウスを用いた解析から、metforminの薬効・副作用標的組織として重要であると考えられている肝取り込みは、Oct1により説明されることを明らかとした。2.異物排泄のシンクロナイゼーション脈絡叢上皮細胞の刷子縁膜にOatp3が発現し、ステロイドのグルクロン酸抱合体や胆汁酸など脂溶性の高い有機アニオンの、脳脊髄液中から脈絡叢内への取り込み過程に働いていることを見いだした。その基質選択性は、肝臓に発現しているOatp1と類似していた。水溶性の有機アニオンを輸送するOat3も同じく脈絡叢の刷子縁膜側に局在している。抗生物質の脳脊髄液中からの排泄について、同じく抗生物質を基質とするペプチドトランスポーター(PEPT2)との寄与率を評価した。cefaclorとcefalexinは構造が非常によく似ているものの(1官能基が異なるのみ)、脳脊髄液からの消失速度には顕著な違いが観察され、cefaclorの消失の方が早かった。阻害実験を行うと両化合物で、主として排泄に関与しているトランスポーターが異なっており、cefaclorはbenzylpenicillin感受性の、cefalexinはglysylsarcosine感受性のトランスポーターにより排泄されることが明らかになった。3.取り込み・排泄過程のシンクロナイゼーションの解析1ならびに2で解析した取り込みトランスポーターに対応する排泄側の分子として、Renal Specific Transporterに着目した。HEK293細胞を宿主細胞として安定発現系を作製し、輸送実験を行ったところ、膜電位に依存したp-aminohippurateの輸送活性を示し、生理的な条件下では俳泄側に働いていることが示唆された。近位尿細管の刷子縁膜への局在も、これを示唆している。

1. Synchronization of liver and kidneys It has been revealed that temocaprilat, steroid sulfate and glucuronidate, which are substrates for organic anion transporter-(Oatp/OATP), which acts in liver uptake, are mainly taken up into the kidneys by Oat3, and that there is an amphipathic uptake mechanism of organic anion uptake in the kidneys as well.据揭示，也位于基底外侧膜的OAT1作为一种水溶性，低分子有机阴离子作为一种肾脏摄取。有人提出，排泄器官的分配是由排泄和重吸收确定的。人们认为，可以通过小管的排泄可以通过下面描述的第一个解释。使用Oct1敲除小鼠的分析表明，OCT1解释了肝脏的摄取，这被认为是二甲双胍药物和副作用的靶组织。 2。异物排泄Oatp3的同步在脉络丛上皮细胞的刷边界膜中表达，并且发现高度脂溶性的有机阴离子（如葡萄糖剂类固醇和胆汁酸）在高脂质的有机液中的细胞中活跃于塞氏菌群中，均具有活性。它的底物选择性类似于在肝脏中表达的OATP1。运输水溶性有机阴离子的OAT3也位于脉络丛的刷边界。评估了从脑脊液到肽转运蛋白（PEPT2）的抗生素排泄的贡献率（也使用抗生素作为底物）。尽管头孢菌素和头孢菌素具有非常相似的结构（只有一个功能组不同），但观察到来自脑脊液的消失速率存在显着差异，从而导致头孢克洛消失更快。抑制实验表明，两种化合物主要参与排泄物的转运蛋白不同，头孢菌素被苄基苯甲林敏感的敏感性排泄，头孢霉素被糖基质素敏感的转运蛋白排泄。 3. Analysis of Synchronization of Uptake and Excretion Processes We focused on Renal Specific Transporter as the excretion molecule corresponding to the uptake transporter analyzed in 1 and 2. A stable expression system was prepared using HEK293 cells as host cells, and transport experiments were conducted, and it was suggested that p-aminohippurate transport activity dependent on membrane potential, and that it acts on the surgical side在生理条件下。将近端小管定位到刷子边界膜上也表明了这一点。