薬剤応答性における薬物トランスポートソームの動的制御機構の解明

阐明药物转运体在药物反应中的动态控制机制

基本信息

批准号：
20056005
负责人：
楠原洋之
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20056005/
关键词：
薬学薬剤反応性蛋白トランスポーター複合体

项目摘要

腎薬物輸送におけるH^+/有機カチオン交換輸送系MATEの寄与率を、Mate選択的な阻害剤であるpyrimethamineを用いて評価した。マウスならびにヒト腎刷子縁膜ベシクルにおいて、H+勾配存在下でのmetforminの取り込みをpyrimethamineはほぼ完全に阻害した。またマウスin vivoでは、pyrimethamine投与により、血液中濃度には影響を与えないもののTEAやmetforminの肝・腎臓中濃度の増加が観察され、MATEがこれらのカチオン性薬物の組織内から胆汁、尿中への排泄に重要な役割を果たしていることを明らかとした。しかし、他の腎排泄型のカチオン性化合物に対しては、pyrimethamineの効果は観察されず、腎刷子縁膜にはMATE蛋白以外の排泄メカニズムが働いていることも示唆された。SNX27のMRP4に対する作用に関して、免疫染色法、ビオチニレーション法により評価した。HEK293細胞、COS1細胞において、SNX27の細胞膜分画、およびearly endosomeでの局在が認められた。SXN27ノックダウンHEK293細胞では、MRP4の細胞膜からの内在化抑制が観察され、SNX27がMRP4の細胞膜からの内在化を促進し、細胞膜発現量を負に制御していることを明らかとした。[^<125>I]EGF,[^<125>I]Tfの取り込みは、Hela細胞において、SNX27ノックダウンの影響を受けないことから、SNX27は比較的高い特異性を持って、標的タンパク質に対して作用することが示唆された。

使用乙胺嘧啶（一种 Mate 选择性抑制剂）评估了 H^+/有机阳离子交换转运系统 MATE 对肾脏药物转运的贡献。在小鼠和人肾刷状缘膜囊泡中存在 H+ 梯度时，乙胺嘧啶几乎完全抑制二甲双胍的摄取。此外，在小鼠体内，给予乙胺嘧啶会增加 TEA 和二甲双胍的肝脏和肾脏浓度，尽管血液浓度并未受到影响，这在 TEA 和二甲双胍的排泄中发挥着重要作用。然而，没有观察到乙胺嘧啶对其他肾排泄的阳离子化合物的影响，这表明除MATE蛋白之外的排泄机制在肾刷状缘膜中起作用。通过免疫染色和生物素化评估 SNX27 对 MRP4 的影响。在 HEK293 细胞和 COS1 细胞中，SNX27 位于细胞膜部分和早期内体中。在SXN27敲低的HEK293细胞中，观察到MRP4从细胞膜内化的抑制，揭示SNX27促进MRP4从细胞膜内化并负向调节细胞膜表达水平。 HeLa细胞中[^ 125 I]EGF、[^ 125 I]Tf的摄取不受SNX27敲低的影响，这表明SNX27具有相对较高的特异性并针对蛋白质起作用。