胃癌におけるMSIとhMLH1遺伝子のメチル化およびプロモータ領域の多型の解析

胃癌MSI和hMLH1基因甲基化及启动子区多态性分析

• 批准号: 14770653
• 负责人: 細谷 好則
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770653/
• 关键词: 胃癌; メチル化; MSI; hMLH1; プロモーター領域

背景:胃癌発生のメカニズムを遺伝子レベルで解明し、予防・治療に応用されることが期待されている。目的:胃癌におけるhMLH1遺伝子のプロモーター領域のメチル化とMSIとの関与を検討する。また、hMLH1遺伝子のプロモーター領域のメチル化やMSIとhMLH1の遺伝子多型や組織型、KRAS, BRAFとの関係も同時に検討する。対象:胃癌手術検体、インフォームドコンセントを得られた症例で、多重癌、多臓器癌合併例、残胃癌を除く。期間2002-03年度方法:(1)自治医科大学消化器一般外科で手術施行した胃癌症例を対象として、手術の際に得られた腫瘍、および非腫瘍部組織を研究試料として使用する。(2)この研究試料よりDNAを抽出しポリメラーゼ連鎖反応(PCR)よりMSIを検索する。(3)hMLH1のプロモーター額域のメチル化は、Na-bisulfite処理後、PCR-SSCP法およびdirect sequence法にて、プロモーター領域広範に検索する。(4)hMLH1遺伝子の多型および対立遺伝子の欠失をPCR-SSCP法およびdirect sequence法により検出する。結果:diffuse type 24例、Intestinal type 28例が対象となった。組織型が分化型と未分化型が混合している症例は除外した。1)MSI陽性率2)hMLH-1遺伝子メチル化およびプロモーター量領域の多型3)KRAS mutation4)BRAF mutation以上の検索を施行中であるMSIは未分化型で3例、分化型で1例陽性であった。DNAをbisulfite処理後のメチル化の有無をPCRで検出した。K-rasは3に認められ、すべてIntestinal typeであった。BRAFは全例で陰性であった。MSI陽性胃癌は胃癌全体の10-20%を占め、hMLH1のプロモーター領域のメチル化が関与していた。

背景：期望从基因水平阐明胃癌发生的机制并应用于预防和治疗。目的：探讨胃癌hMLH1基因启动子区甲基化与MSI的关系。我们还将同时检测hMLH1基因启动子区的甲基化情况以及MSI与hMLH1基因多态性、组织类型、KRAS和BRAF之间的关系。研究对象：胃癌手术标本、已获得知情同意的病例，不包括多种癌症、多器官癌症和残留胃癌。时间：2002-2003年方法：（1）手术中获得的肿瘤和非肿瘤组织将作为在自治医科大学消化内科和普通外科手术的胃癌病例的研究样本。 (2) 从该研究样本中提取 DNA 并使用聚合酶链式反应 (PCR) 搜索 MSI。 (3)在亚硫酸氢钠处理后，使用PCR-SSCP方法和直接测序方法在启动子区域广泛寻找hMLH1启动子区域的甲基化。 (4)通过PCR-SSCP和直接测序检测hMLH1基因的多态性和等位基因缺失。结果：弥漫型24例，肠型28例。具有分化和未分化组织学混合的病例被排除在外。 1) MSI阳性率 2) hMLH-1基因甲基化和启动子丰度区多态性 3) KRAS突变 4) BRAF突变 寻找3例以上未分化型MSI和1例分化型阳性 。通过PCR检测亚硫酸氢盐处理后DNA甲基化的存在或不存在。 K-ras检出3例，均为肠型。所有病例 BRAF 均为阴性。 MSI阳性胃癌占所有胃癌的10-20%，与hMLH1启动子区域的甲基化有关。

项目成果

Hosoya Y et al.: "A case of aggressive neuroendocrine carcinoma of the stomach."Gastric Cancer. 6. 55-59 (2003)

Hosoya Y 等人：“胃侵袭性神经内分泌癌的一例。”胃癌。