平滑筋細胞においてアセチルコリン神経伝達を担う膜ドメイン

负责平滑肌细胞中乙酰胆碱神经传递的膜结构域

基本信息

批准号：
13770007
负责人：
飯野哲
金额：
$ 1.54万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

消化管と気管の平滑筋を対象に、主に免疫細胞化学的手法で平滑筋細胞膜ドメインを解析した。これらの組織はアセチルコリン合成酵素(ChAT)や小胞型アセチルコリントランスポーター(VAChT)の免疫組織化学によりアセチルコリン含有神経終末が豊富であることが確認されている。ムスカリン受容体はM1からM5までサブタイプが存在し、消化管と気管ではM2受容体が多く発現している。消化管においてM2受容体はほぼすべての筋層平滑筋と粘膜内平滑筋に発現したが、その発現量には部位差があった。発現が少なかったのは食道粘膜筋板平滑筋、小腸筋層の最内層平滑筋、小腸粘膜内平滑筋、近位結腸筋層平滑筋であった。食道筋層の横紋筋では発現がなかった。小腸と結腸では平滑筋細胞の他に、カハールの間質細胞と呼ばれる細胞にM2受容体の発現が見られた。平滑筋での発現は細胞周囲に限局しており、免疫電顕の結果、細胞膜の細胞質側に免疫活性が限局し主にカベオラが多数分布する部位と一致した。更に、蛍光2重染色標本を共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した結果、M2受容体の免疫活性はカベオラのマーカー分子であるカベオリンの免疫活性の存在部位と主に一致した。一方、平滑筋細胞には膜関連暗調小体を含む膜ドメインがあるが、そのマーカー分子と考えられるビンクリンの存在する部位とはほとんど一致しなかった。一方、カハールの間質細胞においてはM2受容体の発現が細胞膜のみではなく細胞質内にも瀰漫性に見られ、M2受容体の局在化機構に違いがあると考えられた。気管においても筋層を構成する平滑筋細胞にM2受容体は多量に発現していた。平滑筋細胞における分布様式は消化管筋層平滑筋と同様であった。肺内で気管支と肺動静脈の平滑筋を比較すると気管支壁にのみ発現するのが明瞭に確認できた。

针对胃肠道和气管的平滑肌，我们主要采用免疫细胞化学方法对平滑肌细胞膜结构域进行了分析。通过乙酰胆碱合酶（ChAT）和囊泡乙酰胆碱转运蛋白（VAChT）的免疫组织化学证实这些组织富含含有乙酰胆碱的神经末梢。毒蕈碱受体有M1至M5的亚型，其中M2受体在胃肠道和气管中高表达。在胃肠道中，M2受体几乎在所有肌层平滑肌和粘膜内平滑肌中均有表达，但表达水平存在区域差异。食管粘膜肌层平滑肌、小肠最内层肌层平滑肌、小肠粘膜平滑肌、近端结肠肌层平滑肌中表达量较低。食管层横纹肌无表达。除了小肠和结肠中的平滑肌细胞外，在称为卡哈尔间质细胞的细胞中也发现了 M2 受体表达。平滑肌中的表达定位于细胞周边，免疫电镜结果显示免疫活性定位于细胞膜的细胞质侧，对应于许多小窝主要分布的区域。此外，使用共聚焦激光显微镜观察荧光双染样本的结果表明，M2受体的免疫反应性主要与小窝标记分子小窝蛋白的免疫反应性存在的区域一致。另一方面，平滑肌细胞具有含有膜相关暗体的膜结构域，但该结构域与被认为是标记分子的纽蛋白的位点几乎不重合。另一方面，在卡哈尔间质细胞中，不仅在细胞膜上而且在细胞质内都观察到了M2受体的广泛表达，这表明M2受体的定位机制存在差异。在气管中，M2受体在构成肌肉层的平滑肌细胞中也大量表达。平滑肌细胞中的分布模式与胃肠肌层平滑肌中的分布模式相似。通过比较支气管的平滑肌和肺内的肺动静脉，可以明确地确认仅在支气管壁中表达。