ビタミンD生合成調節の分子メカニズムの解明

阐明维生素D生物合成调控的分子机制

基本信息

批准号：
13760094
负责人：
武山健一
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760094/
关键词：
ビタミンD 1α-水酸化酵素副甲状腺関連ペプチドビタミンDレセプター副甲状腺ホルモン転写制御レチノイドレセプター核内レセプタービタミンDレセプター(VDR)ビタミンD1α水酸化酵素転写抑制因子複合体ヒストン脱アセチル化活性 VDIR 遺伝子発現抑制

项目摘要

VDIRを強発現することにより、1α,25(OH)_2D_3依存的な転写抑制が顕著に認められたことから、1α,25(OH)_2D_3による転写抑制においてVDRと共に必須であることを確認した。また、TSA添加により、1α,25(OH)_2D_3による転写抑制が阻害されることから、HDAC2の関与の可能性が示唆された。免疫沈降の結果より、1α,25(OH)_2D_3の存在時、HDAC2およびNCoRがVDIRとVDRを含む複合体に含まれていることが明らかになった。更に、この複合体が実際に1α-nVDRE上で形成されていることをCHIP assayにて確認した。転写抑制メカニズムを解明するために行ったGST-VDIRをbaitとしたタンパク精製によりVDIRとVDRが1α,25(OH)_2D_3依存的に形成する巨大複合体を形成していることが明らかになり、更にその複合体の中にHDAC2およびNcoRが含まれていることを確認した。近年、転写抑制のメカニズムにも様々な因子が関与していることが明らかになっている。しかもそれらは結合するプロモーター配列特異的な複合体を形成していると考えられている。従って、我々が用いているビタミンD依存的に転写抑制が生じるプロモーター上にても、これまで知られていない未知の複合体が形成されている可能性が高いと考えられる。現在までの検討より、ATP依存性クロマチンリモデリング複合体がこの転写抑制に関与していることがわかっており、複数の複合体の関与も予想される。これら遺伝子の転写抑制に組織特異的な転写因子の関与が考えられるので、これら遺伝子のビタミンD依存的な発現抑制機構の組織特異性を証明するために、生化学的な手法を用いて複合体の全構成因子の同定に着手している。

通过强烈表达VDIR，1α，25（OH）_2d_3依赖性转录抑制是显着的，并且可以证实，通过1α，25（OH）_2D_3诱导的转录抑制至关重要。此外，添加TSA会抑制1α，25（OH）_2D_3的转录抑制，这表明HDAC2参与的可能性。免疫沉淀结果表明，在1α，25（OH）_2D_3的情况下，HDAC2和NCOR包含在包含VDIR和VDR的复合物中。此外，通过CHIP测定法证实了这种复合物实际上是在1α-NVDRE上形成的。使用GST-VDIR作为诱饵进行蛋白质纯化以阐明转录抑制的机制，表明VDIR和VDR形成了一种质量的巨大复合物，形成了1α，25（OH）_2D_3依赖性的方式，并进一步确认了HDAC2和NCOR在该复合物中包含HDAC2和NCOR。近年来，已经揭示了转录抑制机制也涉及各种因素。此外，他们被认为形成了特定于结合启动子序列的复杂。因此，在启动子上形成了未知复合物，以维生素D依赖性方式使用。迄今为止的研究表明，该转录抑制涉及ATP依赖性染色质重塑复合物，预计将涉及多个复合物。由于组织特异性转录因子参与这些基因的转录抑制作用，因此可能是为了证明这些基因的维生素D依赖性表达抑制机制的组织特异性，我们已经开始使用生物化学技术来识别复合物的所有组成因子。