ビタミンD生合成調節の分子メカニズムの解明

阐明维生素D生物合成调控的分子机制

基本信息

批准号：
13760094
负责人：
武山健一
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760094/
关键词：
ビタミンD 1α-水酸化酵素副甲状腺関連ペプチドビタミンDレセプター副甲状腺ホルモン転写制御レチノイドレセプター核内レセプタービタミンDレセプター(VDR)ビタミンD1α水酸化酵素転写抑制因子複合体ヒストン脱アセチル化活性 VDIR 遺伝子発現抑制

项目摘要

VDIRを強発現することにより、1α,25(OH)_2D_3依存的な転写抑制が顕著に認められたことから、1α,25(OH)_2D_3による転写抑制においてVDRと共に必須であることを確認した。また、TSA添加により、1α,25(OH)_2D_3による転写抑制が阻害されることから、HDAC2の関与の可能性が示唆された。免疫沈降の結果より、1α,25(OH)_2D_3の存在時、HDAC2およびNCoRがVDIRとVDRを含む複合体に含まれていることが明らかになった。更に、この複合体が実際に1α-nVDRE上で形成されていることをCHIP assayにて確認した。転写抑制メカニズムを解明するために行ったGST-VDIRをbaitとしたタンパク精製によりVDIRとVDRが1α,25(OH)_2D_3依存的に形成する巨大複合体を形成していることが明らかになり、更にその複合体の中にHDAC2およびNcoRが含まれていることを確認した。近年、転写抑制のメカニズムにも様々な因子が関与していることが明らかになっている。しかもそれらは結合するプロモーター配列特異的な複合体を形成していると考えられている。従って、我々が用いているビタミンD依存的に転写抑制が生じるプロモーター上にても、これまで知られていない未知の複合体が形成されている可能性が高いと考えられる。現在までの検討より、ATP依存性クロマチンリモデリング複合体がこの転写抑制に関与していることがわかっており、複数の複合体の関与も予想される。これら遺伝子の転写抑制に組織特異的な転写因子の関与が考えられるので、これら遺伝子のビタミンD依存的な発現抑制機構の組織特異性を証明するために、生化学的な手法を用いて複合体の全構成因子の同定に着手している。

通过强烈表达VDIR，观察到显着的1α,25(OH)_2D_3依赖性转录抑制，证实它与VDR一起对于1α,25(OH)_2D_3的转录抑制是必需的。此外，添加 TSA 可抑制 1α,25(OH)_2D_3 的转录抑制，表明 HDAC2 参与的可能性。免疫沉淀结果显示，在 1α,25(OH)_2D_3 存在的情况下，HDAC2 和 NCoR 包含在含有 VDIR 和 VDR 的复合物中。此外，通过CHIP测定证实该复合物实际上是在1α-nVDRE上形成的。为了阐明转录抑制机制，使用GST-VDIR作为诱饵的蛋白质纯化表明，VDIR和VDR形成依赖于1α,25(OH)_2D_3的大复合物。此外，我们证实HDAC2和NcoR包含在其中。复杂的。近年来，人们已经清楚多种因素参与转录抑制机制。此外，它们被认为形成了与其结合的启动子序列特异性复合物。因此，我们使用的启动子上很可能形成了一种以前未知的复合物，其中转录抑制以维生素 D 依赖性方式发生。迄今为止的研究表明，ATP 依赖性染色质重塑复合物参与了这种转录抑制，并且预计有多个复合物参与其中。由于组织特异性转录因子被认为参与这些基因的转录抑制，因此我们使用生化方法来证明这些基因的维生素D依赖性表达抑制机制的组织特异性，我们已经开始鉴定所有组成因子。。