エピジェティックス制御破綻を介した神経変性機構の分子基盤の構築

表观遗传调控破坏介导的神经退行性机制的分子基础构建

• 批准号: 18659084
• 负责人: 武山 健一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659084/
• 关键词: 神経変性疾患; ポリグルタミン伸長異常; クロマチン; ヒストン修飾; polyQ-AR

申請者はポリグルタミン伸長異常タンパクによるSBMAモデルショウジョウバエを用いた神経変性誘導を指標とした(1)分子遺伝学的アプローチおよび(2)生化学的アプローチによる候補因子探索と、(3)その性状解析からクロマチン構造変換機能異常によるエピジェネティック制御破綻への情報基盤を構築した。(1)分子遺伝学的アプローチによる新規神経変性制御因子の探索SBMAモデルショウジョウバエのpolyQ-AR誘導性の個眼神経変性を指標として、神経変性の変動が観察された25系統を単離した。中でも神経変性を顕著に回復する遺伝子としてRbfの同定に成功し、RbfによるE2F-1転写活性化を破綻させている事を見出した(Suzuki et al.,投稿中)。(2)生化学的アプローチによる新規polyQ-AR相互作用因子の探索クロマチン画分からのpolyQ-ARタンパク複合体精製はトランスジェニックショウジョウバエ個眼より精製後、MALDI-TOF/MS法あるいはLC/MS法にて同定する。その結果、ヒストンシャペロンやelongation factor、RNA結合タンパク等を同定した。3 候補因子の性状解析とエピジェネティック制御情報基盤の構築(1,2)で同定した相互作用因子のクロマチン構造変換能をヒストン修飾や構造、クロマチン構造変換能に着目した生化学的解析を行った。具体的にはヒストンアセチル化、メチル化、ユビキチン化およびリン酸化assay、MNase assay、クロマチンsupercoiling assayやdisruption assayによりin vitro系を構築した。これに必須材料となるヒストン八量体およびDNAとのクロマチン再構築は、HeLa細胞核抽出液およびrecombinant系を両者で整えた。

The applicant established an information base for the induction of neurodegeneration using SBMA model Drosophila with polyglutamine elongation abnormal proteins as indicators (1) a molecular genetic approach and (2) a biochemical approach to search for candidate factors, and (3) analyses of their properties to create an information base for the collapse of epigenetic control due to abnormal chromatin structure conversion function. （1）使用分子遗传学方法探索新的神经变性调节剂，我们分离了25条线，其中使用polyq-ar诱导的果蝇中的眼神经变性观察到神经变性的变化作为指数。其中，我们成功地将RBF鉴定为显着恢复神经变性的基因，并发现它分解了RBF的E2F-1转录激活（Suzuki等人，目前已发布）。 （2）从染色质分数中搜索polyq-ar蛋白复合物的新型polyq-ar相互作用因子纯化是从转基因果蝇眼中纯化的，然后通过maldi-tof/ms或lc/ms方法鉴定。结果，鉴定了组蛋白伴侣，伸长因子，RNA结合蛋白等。 3生化分析的重点是在构建表观遗传控制信息基础架构（1,2）中确定的相互作用因子的组蛋白修饰，结构和染色质结构转化能力（1,2）。具体而言，使用组蛋白乙酰化，甲基化，泛素化和磷酸化测定，MNase分析，染色质超涂料测定和破坏分析来构建体外系统。使用HELA细胞核提取物和重组系统制备了具有组蛋白八聚体和DNA的染色质重建。

项目成果

DEAD-box RNA helicase subunits of the Drosha complex are required for processing of rRNA and a subset of MicroRNAs.

Drosha 复合体的 DEAD-box RNA 解旋酶亚基是 rRNA 和 MicroRNA 子集的加工所必需的。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nat. Cell Biol. 9
• 作者: Fukuda;T.;Yamagata;K.;Fujiyama;S.;Matsumoto;T.;Koshida;I.;Yoshimura;K.;Mihara;M.;Nakamura;T.;Akimoto;C.;Yamamoto;Y.;Katagiri;T.;Foulds;C.;Takezawa;S.;Kitagawa;H.;Takeyama;K.;O'Malley;B.W.;Kato;S.
• 通讯作者: S.

A cell cycle-dependent co-repressor mediates photoreceptor cell-specific nuclear receptor function.

细胞周期依赖性共阻遏物介导感光细胞特异性核受体功能。

• 发表时间: 2007
• 期刊: EMBOJ 26
• 作者: Takezawa;S.;Yokoyama;A.;Okada;M.;Fujiki;R.;Iriyama;A.;Yanagi.Y.;Ito H.;Takada;I.;Kishimoto;M.;Miyajima A.;Takeyama K.;Umesono K.;Kitagawa;H.;Kato;S.
• 通讯作者: S.