エピジェティックス制御破綻を介した神経変性機構の分子基盤の構築

表观遗传调控破坏介导的神经退行性机制的分子基础构建

• 批准号: 18659084
• 负责人: 武山 健一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18659084/
• 关键词: 神経変性疾患; ポリグルタミン伸長異常; クロマチン; ヒストン修飾; polyQ-AR

申請者はポリグルタミン伸長異常タンパクによるSBMAモデルショウジョウバエを用いた神経変性誘導を指標とした(1)分子遺伝学的アプローチおよび(2)生化学的アプローチによる候補因子探索と、(3)その性状解析からクロマチン構造変換機能異常によるエピジェネティック制御破綻への情報基盤を構築した。(1)分子遺伝学的アプローチによる新規神経変性制御因子の探索SBMAモデルショウジョウバエのpolyQ-AR誘導性の個眼神経変性を指標として、神経変性の変動が観察された25系統を単離した。中でも神経変性を顕著に回復する遺伝子としてRbfの同定に成功し、RbfによるE2F-1転写活性化を破綻させている事を見出した(Suzuki et al.,投稿中)。(2)生化学的アプローチによる新規polyQ-AR相互作用因子の探索クロマチン画分からのpolyQ-ARタンパク複合体精製はトランスジェニックショウジョウバエ個眼より精製後、MALDI-TOF/MS法あるいはLC/MS法にて同定する。その結果、ヒストンシャペロンやelongation factor、RNA結合タンパク等を同定した。3 候補因子の性状解析とエピジェネティック制御情報基盤の構築(1,2)で同定した相互作用因子のクロマチン構造変換能をヒストン修飾や構造、クロマチン構造変換能に着目した生化学的解析を行った。具体的にはヒストンアセチル化、メチル化、ユビキチン化およびリン酸化assay、MNase assay、クロマチンsupercoiling assayやdisruption assayによりin vitro系を構築した。これに必須材料となるヒストン八量体およびDNAとのクロマチン再構築は、HeLa細胞核抽出液およびrecombinant系を両者で整えた。

申请人将使用（1）分子遗传学方法和（2）生化方法寻找候选因子，以及（3）以SBMA模型果蝇中多聚谷氨酰胺扩增异常蛋白诱导神经变性为指标来分析其特性。已经构建了由于染色质结构转换功能异常而导致的表观遗传控制失败的信息库。 (1)利用分子遗传学方法寻找新型神经变性调节因子我们以SBMA模型果蝇中的polyQ-AR诱导的小眼神经变性为指标，分离出25株观察到神经变性变化的菌株。其中，我们成功鉴定了Rbf为显着逆转神经退行性变的基因，并发现Rbf破坏了E2F-1转录激活（Suzuki等人，正在进行中）。 (2)使用生化方法寻找新的polyQ-AR相互作用因子从转基因果蝇小眼中纯化并鉴定后，使用MALDI-TOF/MS或LC/MS方法从染色质级分中纯化polyQ-AR蛋白复合物。结果，我们鉴定了组蛋白伴侣、延伸因子、RNA 结合蛋白等。 3 我们对候选因子的表征和表观遗传调控信息平台的构建中确定的相互作用因子进行了生化分析，重点关注组蛋白修饰、结构和染色质结构转化能力 (1, 2) 。具体而言，使用组蛋白乙酰化、甲基化、泛素化和磷酸化测定、MNase 测定、染色质超螺旋测定和破坏测定构建体外系统。使用 HeLa 细胞核提取物和重组系统制备了用组蛋白八聚体和 DNA 进行染色质重建的重要材料。

项目成果

DEAD-box RNA helicase subunits of the Drosha complex are required for processing of rRNA and a subset of MicroRNAs.

Drosha 复合体的 DEAD-box RNA 解旋酶亚基是 rRNA 和 MicroRNA 子集的加工所必需的。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nat. Cell Biol. 9
• 作者: Fukuda;T.;Yamagata;K.;Fujiyama;S.;Matsumoto;T.;Koshida;I.;Yoshimura;K.;Mihara;M.;Nakamura;T.;Akimoto;C.;Yamamoto;Y.;Katagiri;T.;Foulds;C.;Takezawa;S.;Kitagawa;H.;Takeyama;K.;O'Malley;B.W.;Kato;S.
• 通讯作者: S.

A cell cycle-dependent co-repressor mediates photoreceptor cell-specific nuclear receptor function.

细胞周期依赖性共阻遏物介导感光细胞特异性核受体功能。

• 发表时间: 2007
• 期刊: EMBOJ 26
• 作者: Takezawa;S.;Yokoyama;A.;Okada;M.;Fujiki;R.;Iriyama;A.;Yanagi.Y.;Ito H.;Takada;I.;Kishimoto;M.;Miyajima A.;Takeyama K.;Umesono K.;Kitagawa;H.;Kato;S.
• 通讯作者: S.