バセドウ病眼症の発症機構の解明と新たな治療法の開発

阐明格雷夫斯眼病的发病机制并开发新疗法

基本信息

批准号：
01F00334
负责人：
中尾一和
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

バセドウ病眼症はバセドウ病に関連して眼窩組織のおこる自己免疫反応によって引き起こされる。その主要自己抗原の実態は依然不明であるが、有力な候補としてバセドウ病の自己抗原であるTSHレセプターが考えられている。実際、眼窩組織中にTSHレセプターmRNAや同蛋白の存在が示され、病態との関連も示唆されている。そこで今回、甲状腺特異的MHC-ClassII発現Transgenic mouseを作製し、機能解析を行った。甲状腺上皮細胞は自己免疫性甲状腺疾患の標的細胞であり、バセドウ病の甲状腺細胞においてMHC-ClassIIが過剰発現することが既に示されている。しかし、そのようなMHC-ClassII発現がバセドウ病の発病にどういう役割を果たしているかはまだ明らかではない。そこで、甲状腺細胞にMHC-ClassIIを特異的に発現するTransgenic mouseを作製し、そのmouseの甲状腺機能と自己免疫異常の有無についてまず検討した。ヒトTSHレセプターのpromoterとIAκ(α+β)遺伝子からなるDNA ConstructをC3H/He mouseに導入し、3つのTransgenic mouse (Tg mouse) line、(#1、#4、#5)を樹立した。免疫蛍光染色でIAκ(α+β)蛋白の甲状腺細胞の発現を調べ、#1と#5でMHC-ClassII発現を認めた。8-119週齢の様々の週齢のTg mouseの甲状腺組織像をHE染色で検討した。Tg mouseはWild type mouse (WT)に比べては明らかな異常は認めなかった。CD45の染色によるリンパ球浸潤の検討でも相違を認めなかった。8週齢のTg mouseのFT4はWTよりやや低かった(P<0.05)が、明らかな甲状腺機能異常は見出されなかった。8-12週齢のTg mouseの血清TRAb抗体を測定したが、有意な異常を認めなかった。現在のところバセドウ病やバセドウ病眼症の発症を認めていない。この結果は、同疾患を引き起こすには単なるMHC-ClassIIの発現だけでは不十分であることを示唆している。同トランスジェニックマウスの眼窩組織においては、これまで検討した限り、リンパ球の浸潤等を含めて眼症を示唆するような所見は得られなかった。今後同Tg mouseを用いて、MHC-ClassII発現甲状腺細胞の抗原提示細胞としての意義や免疫反応における役割についてさらに検討する予定である。

格雷夫斯眼病是由与格雷夫斯病相关的眼眶组织中的自身免疫反应引起的。尽管主要自身抗原的实际状态仍不清楚，但格雷夫斯病的自身抗原 TSH 受体被认为是强有力的候选者。事实上，已经证明眼眶组织中存在 TSH 受体 mRNA 和蛋白质，并且还表明与病理状况之间存在关系。因此，我们创建了表达甲状腺特异性 MHC-II 类的转基因小鼠并进行了功能分析。甲状腺上皮细胞是自身免疫性甲状腺疾病的靶细胞，此前已有研究表明，格雷夫斯病的甲状腺细胞中MHC-II类过度表达。然而，目前尚不清楚此类 MHC-II 类表达在格雷夫斯病的发病机制中起什么作用。因此，我们创建了在甲状腺细胞中特异性表达 MHC-II 类的转基因小鼠，并首先检查了它们的甲状腺功能以及是否存在自身免疫异常。我们将由人 TSH 受体启动子和 IAκ (α+β) 基因组成的 DNA 构建体导入 C3H/He 小鼠中，并建立了三个转基因小鼠（Tg 小鼠）系（#1、#4、#5）。免疫荧光染色检测甲状腺细胞IAκ(α+β)蛋白表达，#1和#5观察到MHC-ClassII表达。使用HE染色检查8至119周龄不同年龄的Tg小鼠的甲状腺组织图像。与野生型小鼠（WT）相比，Tg 小鼠没有观察到明显异常。 CD45染色未观察到淋巴细胞浸润的差异。虽然8周龄Tg小鼠的FT4略低于WT（P<0.05），但未发现明显的甲状腺功能障碍。检测8-12周龄Tg小鼠血清TRAb抗体，未观察到明显异常。目前尚未观察到格雷夫斯病或格雷夫斯病眼病的发生。这一结果表明，仅 MHC-II 类的表达不足以引起该疾病。就我们迄今为止的检查而言，在转基因小鼠的眼眶组织中没有观察到任何提示眼病的发现，包括淋巴细胞浸润。未来，我们计划使用相同的Tg小鼠进一步研究表达MHC-II类的甲状腺细胞作为抗原呈递细胞的重要性及其在免疫反应中的作用。