粘膜の炎症におけるレチノイン酸の役割と作用メカニズムについて

视黄酸在粘膜炎症中的作用及作用机制

• 批准号: 13771083
• 负责人: 竹之内 信子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771083/
• 关键词: retinoic acid; polymeric immunoglobulin receptor; NF-κB; TNF-a

TNF-αによるplgR遺伝子発現がレチノイン酸によって増加するメカニズムについて,特に転写レベルでの制御について詳細に検討した。1)レチノイン酸によるNF-κBの変化についてHT-29細胞において,TNF-αによるpIgR遺伝子発現にはNF-κBが関与していることがすでに明らかである。そこで,レチノイン酸によりNF-κBの活性化に変化があるかを検討する目的で,HT-29細胞をTNF-α単独,またはTNF-αとall trans-レチノイン酸で90分間刺激し,nuclear extractを調製してpIgR 5'上流域に存在するNF-κB結合部位(κB2)をプローブとしてgel shift assayを行った。その結果,レチノイン酸を加えることでκB2に結合するNF-κBの量に変化は見られなかった。2)retinoic acidがRNA polymerase IIに及ぼす影響についてレチノイン酸によるpIgR遺伝子発現量の増加が,転写の活性化によるものなのか,それともmRNAの安定性によるものなのかを検討する目的で,HT-29細胞をTNF-α単独またはTNF-αとall trans-レチノイン酸で48時間刺激後,RNA polymerase II阻害剤である5,6-dichloro-1-β-ribofuranosyl-benzimidazole(DRB)を加えて0,1,3,6時間後のpIgR mRNA量の変化をnorthen blot法により検討した。その結果,TNF-α単独ではDRBを加えることでpIgR mRNA量が減少した。しかしながらall trans-レチノイン酸を加えても,DRBによるpIgR mRNA量の変化は見られなかった。以上の結果からレチノイン酸によるpIgR遺伝子発現の増加は,転写の活性化ではなくmRNAの安定性が増加することによるものであることが示唆された。

我们详细研究了视黄酸增加TNF-α诱导的plgR基因表达的机制，特别是转录水平的调节。 1) 视黄酸诱导的NF-κB的变化 已经清楚NF-κB参与HT-29细胞中TNF-α诱导的pIgR基因表达。因此，为了检验视黄酸是否改变NF-κB的活化，单独用TNF-α或用TNF-α和全反式视黄酸刺激HT-29细胞90分钟，并进行核提取物凝胶位移测定。使用 pIgR 5' 上游区域中的 NF-κB 结合位点 (κB2) 作为探针进行。结果，通过添加视黄酸，未观察到与κB2结合的NF-κB的量发生变化。 2) 视黄酸对 RNA 聚合酶 II 的影响 为了研究视黄酸引起的 pIgR 基因表达增加是由于转录激活还是 mRNA 稳定性，我们用 HT-29 单独用 TNF-α 或 TNF-α 刺激细胞后α和全反式视黄酸48小时，RNA聚合酶使用Northen印迹法检测添加II抑制剂5,6-二氯-1-β-呋喃核糖基-苯并咪唑(DRB)后0、1、3和6小时pIgR mRNA水平的变化。结果显示，单独使用TNF-α时，加入DRB后pIgR mRNA的量减少。然而，即使添加所有反式视黄酸，也没有观察到DRB导致的pIgR mRNA水平的变化。这些结果表明，视黄酸引起的pIgR基因表达的增加是由于mRNA稳定性的增加而不是转录激活。