粘膜の炎症におけるレチノイン酸の役割と作用メカニズムについて

视黄酸在粘膜炎症中的作用及作用机制

• 批准号: 13771083
• 负责人: 竹之内 信子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771083/
• 关键词: retinoic acid; polymeric immunoglobulin receptor; NF-κB; TNF-a

TNF-αによるplgR遺伝子発現がレチノイン酸によって増加するメカニズムについて,特に転写レベルでの制御について詳細に検討した。1)レチノイン酸によるNF-κBの変化についてHT-29細胞において,TNF-αによるpIgR遺伝子発現にはNF-κBが関与していることがすでに明らかである。そこで,レチノイン酸によりNF-κBの活性化に変化があるかを検討する目的で,HT-29細胞をTNF-α単独,またはTNF-αとall trans-レチノイン酸で90分間刺激し,nuclear extractを調製してpIgR 5'上流域に存在するNF-κB結合部位(κB2)をプローブとしてgel shift assayを行った。その結果,レチノイン酸を加えることでκB2に結合するNF-κBの量に変化は見られなかった。2)retinoic acidがRNA polymerase IIに及ぼす影響についてレチノイン酸によるpIgR遺伝子発現量の増加が,転写の活性化によるものなのか,それともmRNAの安定性によるものなのかを検討する目的で,HT-29細胞をTNF-α単独またはTNF-αとall trans-レチノイン酸で48時間刺激後,RNA polymerase II阻害剤である5,6-dichloro-1-β-ribofuranosyl-benzimidazole(DRB)を加えて0,1,3,6時間後のpIgR mRNA量の変化をnorthen blot法により検討した。その結果,TNF-α単独ではDRBを加えることでpIgR mRNA量が減少した。しかしながらall trans-レチノイン酸を加えても,DRBによるpIgR mRNA量の変化は見られなかった。以上の結果からレチノイン酸によるpIgR遺伝子発現の増加は,転写の活性化ではなくmRNAの安定性が増加することによるものであることが示唆された。

详细研究了视黄酸通过视黄酸增加PLGR基因表达的机制，尤其是在转录水平上的调节。 1）视黄酸的NF-κB变化已经很明显，NF-κB参与了HT-29细胞中TNF-α的PIGR基因的表达。因此，为了研究视黄酸是否改变了NF-κB的激活，单独或用TNF-α或用TNF-α刺激HT-29细胞和所有反可活动酸刺激90分钟，制备了核提取物，并使用NF-κB结合位点（κB2）（κB2）在Pigr 5'的上Upstream区域中使用NF-κB结合位点（κB2）进行了凝胶转移。结果，当加入视黄酸时，与κB2结合的NF-κB量未观察到任何变化。 2) To investigate whether the increase in pIgR gene expression level by retinoic acid was due to transcriptional activation or mRNA stability, HT-29 cells were stimulated with TNF-α alone or with TNF-α and all tr​​ans-retinoic acid for 48 hours, and then the RNA polymerase II inhibitor 5,6-dichloro-1-β-ribofuranosyl-benzimidazole (DRB) was added to the RNA通过Northen blot方法研究了聚合酶II抑制剂，并在0、1、3和6小时之后的PIGR mRNA水平变化。结果，当添加DRB时，单独使用TNF-α降低了PIGR mRNA的量。但是，即使添加了所有反视网膜酸，也没有观察到由于DRB引起的PIGR mRNA量的变化。这些结果表明，视黄酸的pIGR基因表达增加是由于mRNA稳定性增加而不是转录激活所致。