ヒトSecretory Component遺伝子発現調節機構の解析

人类分泌成分基因表达调控机制分析

基本信息

批准号：
05771494
负责人：
竹之内信子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771494/
关键词：
分泌型IgA Secretory Component IFN-gamma TNF-alpfa IL-4 IL-1beta Northern Blot

项目摘要

本年度はSecretory Component(SC)遺伝子発現調節機構解析の一端として2つの研究を進めた。その第1はサイトカインによるSCmRNA発現である。IFN-gamma,TNF-alpfaの刺激によりHT-29細胞培養上清中にSC量が増加することが、また、IL-4により^<125>I-ラベルしたpolymeric-IgAとの結合量が増加することが知られている。今回、それらの増加がmRNAレベルでもみられることをNorthern Blot法により明らかとした。また新たにIL-1betaによるSCmRNA発現の有意な増加も明らかにした。さらに、SCmRNA発現調節機構を詳細に検討するために、ヒトSC遺伝子のプロモーター領域の構造解析に着手した。JCRB遺伝子バンクより供与されたhuman genomic DNA livraryより約200万個のプラークを、ECL direct DNA labelling systemでラベルしたhuman SC cDNA EcoRI-PvuII fragment(Exonl^〜Exon3の一部を含む)を用いてスクリーニングし、1個のクローンを得た。さらに制限酵素消化による制限マップの作製を行なった。Exon1に対応するoligomerを作製し、Southern hybridizationを行なった結果、left arm側約1.5kbにhybridizeするバンドが得られた。このfragmentに遺伝子発現に寄与するプロモーター配列が含まれるかどうか、現在検討中である。これらの成果の一部は本報告書に記載したとおり論文とした。また、他の一部についてはより詳細な検討を重ね、報告を行なう予定である。

今年，我们进行了两项研究，作为分泌成分（SC）基因表达调控机制的一部分。首先是细胞因子的SCMRNA表达。众所周知，刺激IFN-gamma和TNF-AlpFA会增加HT-29细胞培养上清液中SC的量，并且IL-4增加了与 ^<125> I标记的聚合物-IGA的结合量。这次，我们透露，通过北印迹法在mRNA水平上也可以看到这些增加。我们还揭示了由IL-1Beta引起的SC mRNA表达显着增加。此外，为了详细研究SC mRNA表达调节的机制，我们开始对人类SC基因的启动子区域进行结构分析。使用ECL直接DNA标记系统标记的人类SC cDNA Ecori-PVUII片段（包括exonl^ to Exon3）筛选了由JCRB基因库捐赠的人类基因组DNA生计大约200万个斑块，并获得了一个克隆。此外，通过限制酶消化制备限制图。制备了与Exon1相对应的低聚物，并进行了南部杂交，从而导致频带在左臂上杂交约1.5 kb。目前正在研究该片段是否包含有助于基因表达的启动子序列。如本报告所述，其中一些结果作为论文发表。此外，其他一些部分将进行更详细的审查和报告。