ヒトpIg-receptor遺伝子発現調節機構の解析

人猪Ig受体基因表达调控机制分析

基本信息

批准号：
09771520
负责人：
竹之内信子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771520/
关键词：
polymeric immunoglobulin receptor secretory component NF-κB transcriptional regulation TNF-α NF-kB

项目摘要

平成10年度はpIgR遺伝子発現におけるNF-κBの役割について検討した。1. 方法(1)cycloheximide(CHX)(2.5μg/ml),12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)(10ng/ml)を用いてHT-29細胞をそれぞれ1.5時間、48時間TNF-αの共存下で刺激し、nuclear extractを抽出した。ヒトpIgR遺伝子5'上流域のNF-κB結合部位(κB2,転写開始地点側)のDNAをprobeとしてgel shift assayを行った。(2)HT-29細胞を1)と同様に48時間co-stimulation後RNAを抽出し、northern blot法によりpIgR mRNA発現を検討した。一方、NF-κB阻害剤であるpyrrolidinedithiocarbamate(PDTC)を用いて、TNF-αによるpIgR遺伝子発現が阻害されるか検討した。2. 結果CHXとTNF-αのco-stimulationにより、48時間後にはNF-κBのtranslocationは完全に抑制された。TPAとTNF-αのco-stimulation48時間後ではNF-κBのtranslocation量はTNF-α単独よりも増加した。また、CHXまたはTPAとのco-stimulationいづれにおいてもpIgR mRNA発現は完全に抑制された。PDTC処理によりpIgR mRNAの発現は抑制されたが、完全な抑制ではなかった。3. 考察CHXとYNF-αのco-stimulationにより、NF-κBのtranslocationとpIgR遺伝子発現の双方が阻害されていることは、TNF-α刺激によるpIgR遺伝子発現には新規タンパク質合成が必要であり、その一つに、NF-κBの新規合成が関与していることを示している。しかしながら、NF-κB阻害剤によるpIgR遺伝子発現の抑制が不完全であったことは、pIgR遺伝子発現にはNF-κBの活性化だけではなく、他の制御因子も必要であることが示唆される。また、TNF-αとTPAによるNF-κBの活性化はTNF-αとTPAそれぞれの作用によるIκBリン酸化の相加作用の結果であると考えられるが、pIgR遺伝子発現が完全に抑制されていることは、PKCの活性化によって抑制される制御因子の関与が示唆される。

1998年，我们研究了NF-κB在pIgR基因表达中的作用。 1.方法（1）使用放线菌酮（CHX）（2.5μg/ml）和12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯（TPA）（10ng/ml），将HT-29细胞与TNF-孵育1.5小时，然后分别在α存在下刺激提取48小时。使用人pIgR基因5'上游区域的NF-κB结合位点(κB2，转录起始位点侧)的DNA作为探针进行凝胶位移测定。 (2)与1)同样地共刺激HT-29细胞48小时后，提取RNA，通过Northern blotting检测pIgR mRNA的表达。另一方面，使用 NF-κB 抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯 (PDTC)，我们研究了是否可以抑制 TNF-α 诱导的 pIgR 基因表达。 2. 结果 CHX 和 TNF-α 的共刺激在 48 小时后完全抑制了 NF-κB 易位。 TPA 和 TNF-α 共刺激 48 小时后，与单独使用 TNF-α 相比，NF-κB 易位量增加。此外，在与 CHX 或 TPA 共刺激中，pIgR mRNA 表达被完全抑制。 PDTC 治疗抑制了 pIgR mRNA 表达，但并不完全。 3.讨论CHX和YNF-α的共刺激抑制NF-κB易位和pIgR基因表达的事实表明，由于TNF-α刺激，pIgR基因表达需要新的蛋白质合成，这表明从头合成。 NF-κB参与其中之一。然而，NF-κB抑制剂对pIgR基因表达的抑制是不完全的，这表明pIgR基因表达不仅需要NF-κB激活，还需要其他调节因子。此外，TNF-α和TPA对NF-κB的激活被认为是TNF-α和TPA各自的作用对IκB磷酸化的相加作用的结果，但pIgR基因的表达被完全抑制，这表明了其中的作用。 PKC 激活抑制的调节因子。