ヒトpIg-receptor遺伝子発現調節機構の解析

人猪Ig受体基因表达调控机制分析

• 批准号: 09771520
• 负责人: 竹之内 信子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771520/
• 关键词: polymeric immunoglobulin receptor; secretory component; NF-κB; transcriptional regulation; TNF-α; NF-kB; polymeric immunoglobulin receptor; secretory component; NF-κB; transcriptional regulation; TNF-α; NF-kB

平成10年度はpIgR遺伝子発現におけるNF-κBの役割について検討した。1. 方法(1)cycloheximide(CHX)(2.5μg/ml),12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)(10ng/ml)を用いてHT-29細胞をそれぞれ1.5時間、48時間TNF-αの共存下で刺激し、nuclear extractを抽出した。ヒトpIgR遺伝子5'上流域のNF-κB結合部位(κB2,転写開始地点側)のDNAをprobeとしてgel shift assayを行った。(2)HT-29細胞を1)と同様に48時間co-stimulation後RNAを抽出し、northern blot法によりpIgR mRNA発現を検討した。一方、NF-κB阻害剤であるpyrrolidinedithiocarbamate(PDTC)を用いて、TNF-αによるpIgR遺伝子発現が阻害されるか検討した。2. 結果CHXとTNF-αのco-stimulationにより、48時間後にはNF-κBのtranslocationは完全に抑制された。TPAとTNF-αのco-stimulation48時間後ではNF-κBのtranslocation量はTNF-α単独よりも増加した。また、CHXまたはTPAとのco-stimulationいづれにおいてもpIgR mRNA発現は完全に抑制された。PDTC処理によりpIgR mRNAの発現は抑制されたが、完全な抑制ではなかった。3. 考察CHXとYNF-αのco-stimulationにより、NF-κBのtranslocationとpIgR遺伝子発現の双方が阻害されていることは、TNF-α刺激によるpIgR遺伝子発現には新規タンパク質合成が必要であり、その一つに、NF-κBの新規合成が関与していることを示している。しかしながら、NF-κB阻害剤によるpIgR遺伝子発現の抑制が不完全であったことは、pIgR遺伝子発現にはNF-κBの活性化だけではなく、他の制御因子も必要であることが示唆される。また、TNF-αとTPAによるNF-κBの活性化はTNF-αとTPAそれぞれの作用によるIκBリン酸化の相加作用の結果であると考えられるが、pIgR遺伝子発現が完全に抑制されていることは、PKCの活性化によって抑制される制御因子の関与が示唆される。

在1998年，研究了NF-κB在PIGR基因表达中的作用。 1。在存在TNF-α的情况下，使用环己酰亚胺（CHX）（2.5μg/mL）和12-o-二甲基氯肾小管13-乙酸乙酸盐（TPA）（TPA）（TPA）（TPA）（10 ng/ml）和核提取物分别刺激方法（1）HT-29细胞。使用DNA在人类PIGR基因5'的上游区域的NF-κB结合位点（κB2，转录起点）作为探针进行凝胶移位测定。 （2）在以与1相同的方式为HT-29细胞共48小时后，提取RNA，并通过Northern blot方法检查了PIGR mRNA表达。另一方面，NF-κB抑制剂（PDTC）用于研究是否抑制TNF-α的PIGR基因的表达。 2。结果CHX和TNF-α的共刺激完全抑制了48小时后NF-κB的易位。在TPA和TNF-α共48小时共同刺激后，与单独使用TNF-α相比，NF-κB的易位量增加。此外，在与CHX或TPA的共刺激中，PIGR mRNA表达完全抑制。 PDTC治疗抑制了PIGR mRNA表达，但不能完全抑制。 3。讨论通过CHX和YNF-α的共刺激对NF-κB易位和PIGR基因表达的抑制表明，通过刺激TNF-α，需要新的蛋白质合成才能进行PIGR基因表达，其中之一涉及NF-κB的新合成。然而，NF-κB抑制剂对PIGR基因表达的不完全抑制表明，不仅激活NF-κB，而且需要其他调节剂才能进行PIGR基因表达。此外，TNF-α和TPA的NF-κB激活被认为是由于TNF-α和TPA的影响IκB磷酸化的累加作用的结果，但是对PIGR基因表达的完全抑制表明，PKC激活抑制了调节剂。