ハンセン病発症に関わる細胞内らい菌潜伏機構の研究

麻风分枝杆菌与汉森病发病相关的细胞内潜伏机制研究

• 批准号: 13226132
• 负责人: 鈴木 幸一
• 金额: --
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226132/
• 关键词: ハンセン病; らい菌; 抗酸菌; TACO; ファゴゾーム; ライソゾーム; 細胞内潜伏; 殺菌

らい菌が宿主マクロファージのファゴゾームの中で潜伏・増殖することがハンセン病の発症と関わっていると考えられていたが、その分子機構は不明であった。最近、マクロファージがM. bovis BCG生菌を貧食した際、細胞膜からファゴゾーム膜へと局在変化することによりライソゾームとの融合を阻止する働きを持つ蛋白としてTACO(tryptophan aspartate-containing coat protein)が同定されたことから、らい菌感染におけるTACOの役割について研究を行った。Jean Pieters(Basel Institute for Immunology)から供与を受けた家兎抗TACO抗体を用いて行ったハンセン病患者皮膚生検組織の免疫染色において、らい菌を貧食した細胞のファゴゾームにTACOの集積が確認された。培養マクロファージ細胞株にヌードマウス足蹠にて継代したらい菌Thai53株を感染させると、同様に菌を包むファゴゾームにTACOの局在がみられたが、加熱死菌ではそのような変化が起こらなかった。以上のことから、らい菌感染時においてもTACOの局在変化がファゴゾーム・ライソゾーム融合に関与することが示唆された。このTACOの細胞内での局在の変化と発現量変化をもたらす分子機構について検討する目的で、培養マクロファージにらい菌を感染させたのち経時的にmRNAを調整し、RT-PCRおよびノーザン解析を行った。その結果、感染後約4時間で発現量が減少し24時間で前値に復することがわかった。TACO遺伝子発現量変化をもたらす機構を検討するためにヒトTACO遺伝子のプロモーター領域をクローニングし現在解析中である。また、TACO蛋白の細胞内局在変化をもたらすシグナル伝達経路に関しても検討を進めている。

人们认为麻风分枝杆菌在宿主巨噬细胞吞噬体中的孵化和增殖与汉森病的发病有关，但其分子机制仍不清楚。最近，当巨噬细胞吞噬活的牛分枝杆菌BCG细菌时，TACO（含色氨酸天冬氨酸的外壳蛋白）是一种通过将其定位从细胞膜改变到吞噬体膜来防止与溶酶体融合的蛋白质。对 TACO 在麻风分枝杆菌感染中的作用进行了研究。使用 Jean Pieters（巴塞尔免疫学研究所）捐赠的兔抗 TACO 抗体对汉森氏病患者的皮肤活检组织进行免疫染色，证实了 TACO 在吞噬麻风分枝杆菌 Ta 的细胞的吞噬体中积累。当培养的巨噬细胞系感染在裸鼠足垫中传代的麻风分枝杆菌菌株 Thai53 时，TACO 类似地定位在细菌周围的吞噬体中，但热灭活的细菌则不会发生这种变化。 。这些结果表明，即使在麻风分枝杆菌感染期间，TACO 定位的变化也参与吞噬体-溶酶体融合。为了研究导致 TACO 细胞内定位和表达水平变化的分子机制，我们用麻风分枝杆菌感染培养的巨噬细胞，随时间调整 mRNA，并进行 RT-PCR 和 Northern 分析。结果发现，感染后约4小时表达量下降，24小时内恢复到之前的值。为了研究引起TACO基因表达变化的机制，我们克隆了人类TACO基因的启动子区域，目前正在对其进行分析。我们还在研究导致 TACO 蛋白细胞内定位变化的信号转导途径。