ハンセン病発症に関わる細胞内らい菌潜伏機構の研究

麻风分枝杆菌与汉森病发病相关的细胞内潜伏机制研究

• 批准号: 13226132
• 负责人: 鈴木 幸一
• 金额: --
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226132/
• 关键词: ハンセン病; らい菌; 抗酸菌; TACO; ファゴゾーム; ライソゾーム; 細胞内潜伏; 殺菌

らい菌が宿主マクロファージのファゴゾームの中で潜伏・増殖することがハンセン病の発症と関わっていると考えられていたが、その分子機構は不明であった。最近、マクロファージがM. bovis BCG生菌を貧食した際、細胞膜からファゴゾーム膜へと局在変化することによりライソゾームとの融合を阻止する働きを持つ蛋白としてTACO(tryptophan aspartate-containing coat protein)が同定されたことから、らい菌感染におけるTACOの役割について研究を行った。Jean Pieters(Basel Institute for Immunology)から供与を受けた家兎抗TACO抗体を用いて行ったハンセン病患者皮膚生検組織の免疫染色において、らい菌を貧食した細胞のファゴゾームにTACOの集積が確認された。培養マクロファージ細胞株にヌードマウス足蹠にて継代したらい菌Thai53株を感染させると、同様に菌を包むファゴゾームにTACOの局在がみられたが、加熱死菌ではそのような変化が起こらなかった。以上のことから、らい菌感染時においてもTACOの局在変化がファゴゾーム・ライソゾーム融合に関与することが示唆された。このTACOの細胞内での局在の変化と発現量変化をもたらす分子機構について検討する目的で、培養マクロファージにらい菌を感染させたのち経時的にmRNAを調整し、RT-PCRおよびノーザン解析を行った。その結果、感染後約4時間で発現量が減少し24時間で前値に復することがわかった。TACO遺伝子発現量変化をもたらす機構を検討するためにヒトTACO遺伝子のプロモーター領域をクローニングし現在解析中である。また、TACO蛋白の細胞内局在変化をもたらすシグナル伝達経路に関しても検討を進めている。

据认为，麻风病中麻风病中宿主巨噬细胞的潜在和增殖参与麻风病的发展，但其分子机制尚不清楚。 Recently, when macrophages ate M. bovis BCG live bacteria, TACO (tryptophan aspartate-containing coat protein) was identified as a protein that prevents fusion with lysosomes by localizing from the cell membrane to the phagosomal membrane when macrophages eat poorly of M. bovis BCG bacteria, and therefore researched the role of TACO in leprosy infection.在使用Jean Pieters（巴塞尔免疫学研究所）提供的兔抗taco抗体的麻风病患者的皮肤活检组织中，在患有麻风麻风病的细胞中证实了炸玉米饼的积累。当培养的巨噬细胞细胞系被细菌菌株ThaI53感染时，该细菌菌株被传递在裸鼠的脚下时，在细菌周围的吞噬体中观察到炸玉米饼的定位，但在加热的死亡细菌中没有发生这种变化。从以上，即使在麻风病感染期间，炸玉米饼的定位变化也参与了吞噬溶酶体融合。为了研究导致细胞中炸玉米饼定位和表达水平变化的分子机制，用麻风病感染了培养的巨噬细胞，然后随着时间的推移调整mRNA，然后进行RT-PCR和北方分析。结果，发现表达水平在感染后约4小时降低，而先前的值恢复到24小时。为了研究导致炸玉米饼基因表达水平发生变化的机制，克隆人塔科基因的启动子区域，目前正在分析中。我们还研究了导致炸玉米饼蛋白细胞定位变化的信号传导途径。