天蚕の前幼虫態休眠における新内分泌系の機能解析と分子機構

天然蚕幼体滞育期间新内分泌系统的功能分析及分子机制

• 批准号: 09265202
• 负责人: 鈴木 幸一
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Iwate University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09265202/
• 关键词: 天蚕; 前幼虫休眠; 抑制因子(RF); 成熟因子(MF); KK-42結合タンパク質

イミダゾール化合物で天蚕の人工ふ化に成功している。また実験形態学的手法により、この前幼虫態休眠は中胸に存在する抑制因子(RF)で維持され、第2〜5腹節に存在する成熟因子(MF)で後休眠期が進行すると考えられている。本研究は、これらの全貌を理解するために、RFとMFを単離し、イミダゾール系化合物処理と結合するタンパク質の解析から検討することにした。また、二つの因子の分泌器官を推定するために、数種の抗体を利用し免疫組織化学的に観察した。その結果,(1)FMRFamide抗体に反応する口胃神経系のニューロン前腸と中腸の境界部で、また分泌細胞は中腸皮膜細胞で観察された。この結果、RFとMFの分泌部分にはペプチド分泌細胞の存在が示唆された。(2)これまでの方法(1994)を改変し、酸メタノール溶液で両因子を抽出し、逆相HPLCで分析したところ、従来より簡便で多量の活性画分を得ることができた。このことから、両因子の単離の可能性が一層高まった。(3)休眠期に特異的な7.5kDa(N末端ブッロク)、休眠覚醒にともなっては6.2kDaと5.6kDaのペプチドが強く発現することが明らかになり、それぞれを単離することができた。また、休眠期からはKK-42結合タンパク質を単離することができた。さらに、前幼虫でも活性を有するAny-PPを5齢幼虫血液から単離し構造決定した。これによって、イミダゾール化合物や長期低温による休眠覚醒機構の糸口をとらえることができた。以上のことから、前幼虫態休眠の制御系には上述した分子群が深く関与するものと考えられる。

咪唑化合物已成功地使用了蚕的人工孵化。此外，通过实验形态学方法，人们认为这种植物前的休眠是由中间术中存在的抑制剂（RF）维持的，并且后不足期随着第二至第五个腹侧段落的成熟因子（MF）而进行。为了了解这项研究的全部情况，我们决定研究孤立并与基于咪唑的化合物约束的蛋白质的分析。此外，还使用了几种抗体来估计这两个因素的分泌器官，并观察到免疫组织化学。结果，（1）在响应FMRFAMIDE抗体以及中肠膜细胞的神经元前肠和腹神经系统中肠之间的边界上观察到（1）分泌细胞。这表明在RF和MF的分泌部分中存在肽分泌细胞。 （2）修改了先前的方法（1994），并用酸甲醇溶液提取两个因子，并通过反向相HPLC进行分析，并获得比以前更大的活性分数。这进一步增强了隔离这两个因素的可能性。 （3）据揭示了7.5 kDa（N末端Brock），特异性针对休眠期，6.2 kDa和5.6 kDa肽与休眠觉醒相结合，并分离出每个肽。此外，可以从休眠时期分离KK-42结合蛋白。此外，从第五instar幼虫的血液中分离出来的Any-PP，也有活性，并在结构上分离出来。这使我们能够掌握由于咪唑化合物和长期低温而引起的休眠觉醒机制。从上面可以看出，上述分子基团与控制前休眠的系统深深相关。

项目成果

北城敬子・千田美智子・佐藤由美子 鈴木幸一: "天蚕の前幼虫態休眠を制御する二つの因子の単離工程(2)" 東北蚕糸研究報告. 22. 29 (1997)

Keiko Kitajiro、Michiko Senda、Yumiko Sato、Koichi Suzuki：“控制天然蚕幼虫前休眠的两个因素的分离过程（2）”东北丝绸研究报告。

An Y., Nakajima T. and Suzuki K.: "Immunohistochemical demonstration of mammalian-and FMRFamide-like peptides in the gut ixmervation and endocrine cells of the wild pilkmoth,Antheraea yamamai" Eur.F.Entomol.95(in press). (1998)

An Y.、Nakajima T. 和 Suzuki K.：“野生毛蛾 Antheraea yamamai 的肠道混合和内分泌细胞中哺乳动物和 FMRFamide 样肽的免疫组织化学演示”Eur.F.Entomol.95（印刷中）。

清野 敦・鈴木幸一: "タンパク質レベルから解析した天蚕前幼虫の休眠機構" 東北蚕糸研究報告. 22. 30 (1997)

Atsushi Seino 和 Koichi Suzuki：“从蛋白质水平分析前腹腔蚕幼虫的休眠机制”东北丝绸研究报告。 22. 30 (1997)。