デングウイルスに対する宿主受容体の同定と感染制御

登革热病毒宿主受体的鉴定和感染控制

• 批准号: 13226108
• 负责人: 鈴木 康夫
• 金额: --
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226108/
• 关键词: デングウイルス; 受容体; 宿主; ミクロドメイン; 糖脂質; 糖タンパク質; デング; レセプター; デングウイルス; 受容体; 宿主; ミクロドメイン; 糖脂質; 糖タンパク質; デング; レセプター

1.デングウイルス感受性細胞の簡便な測定法を開発した。標的細胞に対してウイルス液を反応させ、細胞に吸着したウイルスをウイルス抗体、およびフローサイトメータにより検出する新しい簡便な方法を開発した。2.新しいレセプターアッセイ法を開発し、デングウイルス感受性ヒト赤芽球系細胞に、デング2型ウイルスと特異的結合性を持つタンパク質および糖脂質の存在を明らかにした。東南アジアで流行しているデング2型ウイルスが吸着・感染増殖できる標的細胞としてヒト赤芽球由来の細胞(K-562)を上記の方法により特定した。今回、この細胞を大量培養し、そこから、デング2型ウイルス(D2T7)と特異的結合性を示す物質を探索した。その結果、デング2型ウイルスと特異的に結合するタンパク質(おそらく糖タンパク質)および糖脂質の存在を明らかにした。ウイルス結合性タンパク質はSDS-PAGEによってタンパク質を変性させた状態でもウイルスと結合性を示したことから糖タンパク質であり、ウイルスはそれに含まれる糖鎖へ結合している可能性が強く示唆された。また、本タンパク質は、宿主細胞膜ミクロドメイン(Lipid Raft)に存在する可能性が示唆された。3.ヒト赤芽球系細胞からデング2型ウイルスと特異的に結合する糖脂質の単離に成功した。ヒト赤芽球系細胞(K-562)細胞をクロロフォルム/メタノー抽出、アルカリ水解、イオン交換および吸着クロマトグラフィーなどにより純粋な形で分離することができた。本糖脂質は、TLC上でGM1aとGD1aの間に展開される。現在、この化学構造を解析中である。また、この糖脂質に対するモノクローナル抗体を作成している。これにより、本物質の宿主動物組織・細胞における局在性が明らかにできる。

1。已经开发了一种测量登革热病毒敏感细胞的简单方法。已经开发了一种新的简单方法，可以与病毒溶液针对靶细胞反应，并使用病毒抗体和流式细胞仪检测在细胞上吸附的病毒。 2。开发了一种新的受体测定，以揭示蛋白质和糖脂的存在，这些蛋白质和糖脂与登革热病毒敏感的人类红细胞细胞系中具有特异性结合的2型病毒。人类红细胞衍生的细胞（K-562）被鉴定为靶细胞，可以通过登革热2型病毒吸附并感染地增殖，这在东南亚普遍存在。这次，培养了大量这些细胞，从那里搜索具有特异性结合特性的物质（D2T7）。结果表明，蛋白质（可能是糖蛋白）和特异性结合到登革热2型病毒的蛋白质（可能是糖蛋白）。病毒结合蛋白是糖蛋白，即使蛋白通过SDS-PAGE变性，也会与病毒结合，并且强烈建议该病毒可能与其中包含的聚糖结合。还建议该蛋白可能存在于宿主细胞膜微域（脂质筏）中。 3。成功分离的糖脂，这些糖脂特异性地结合了人类红细胞细胞的2型登革热病毒。人红细胞细胞（K-562）细胞可以通过氯仿/甲醇提取，碱性水解，离子交换和吸附色谱法以纯形式分离。糖脂是在TLC上的GM1A和GD1A之间开发的。该化学结构目前正在分析中。此外，已经制备针对该糖脂的单克隆抗体。这将揭示该物质在宿主动物组织和细胞中的定位。