白血病関連キメラ因子による細胞死誘導因子Bimの発現抑制の機序とその意義の解明

阐明白血病相关嵌合因子抑制细胞死亡诱导因子Bim表达的机制和意义

• 批准号: 13216093
• 负责人: 稲葉 俊哉
• 金额: $ 3.97万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216093/
• 关键词: 遺伝子; 癌; アポトーシス; シグナル伝達; 発生・分化

Bimはサイトカインによって発現が抑制されるBH3細胞死誘導因子として造血前駆細胞や神経細胞のアポトーシス制御メカニズムに重要な役割を果たしている。またBcr-Ablなど白血病関連キメラ因子にはBimの発現を抑制するものがある。このためわれわれはサイトカインからのシグナルやキメラによってBimの転写が抑制されるメカニズムをプロモーター解析を通して解明することを試みた。Bim遺伝子前後のゲノムDNAの配列をデータベースから現時点で得られる配列をもとにサザンブロット法やPCR法などを用いて200Kbにわたり決定し、RNase protection assayによりBim遺伝子転写開始点を同定した。TATAボックスは同定できなかった。その上で20個以上のゲノムプローブを作成して定法に基づきDNase高感受性領域の同定を行い、プロモーターと想定される領域以外に四つの遠隔エンハンサーの候補領域を同定した。三つは上流ひとつは下流にあったが、最上流のものは隣接する遺伝子のイントロンに存在することから、その遺伝子のエンハンサーである可能性が高いと考えられた。さらに定法に基づきプロモーター活性を測定したところ、転写開始点より上流70〜105bpのきわめてGC配列に富む領域はサイトカイン存在下でも非常に強い転写促進活性を持つことが判明した。このことから強力な転写抑制因子がサイトカインやキメラ依存性に発現・活性化して結合するサイレンサー領域が存在するものと推定され、現在同定を急いでいる。

Bim作为BH3细胞死亡诱导因子，其表达被细胞因子抑制，在造血祖细胞和神经细胞的凋亡控制机制中发挥着重要作用。此外，一些与白血病相关的嵌合因子（例如 Bcr-Abl）会抑制 Bim 表达。因此，我们试图通过启动子分析来阐明来自细胞因子和嵌合体的信号抑制Bim转录的机制。根据目前数据库中可获得的序列，使用 Southern blotting 和 PCR 方法确定了 Bim 基因前后超过 200 Kb 的基因组 DNA 序列，并使用 RNase 保护测定鉴定了 Bim 基因转录起始位点。无法识别 TATA 盒子。然后，创建了 20 多个基因组探针，并使用标准方法鉴定了 DNase 高度敏感区域，除了假定为启动子的区域之外，还鉴定了四个远程增强子的候选区域。三个位于上游，一个位于下游，但由于最上游的一个位于相邻基因的内含子中，因此认为它很可能是该基因的增强子。此外，当使用标准方法测量启动子活性时，发现转录起始位点上游70至105bp的区域富含GC序列，即使在细胞因子存在下也具有非常强的转录促进活性。据此，推测存在强转录抑制子以细胞因子和嵌合体依赖性方式表达、激活和结合的沉默子区域，目前正在努力对其进行鉴定。

项目成果

Dang J., Inukai T., Kurosawa H., Goi K., Inaba T., Lenny N.T., Downing J.R., Stifani S., Look A.T.: "The e2a-hlf oncoprotein activates groucho-related genes and suppresses runx1"Mol. Cell. Biol.. 21. 5935-5945 (2001)

Dang J.、Inukai T.、Kurosawa H.、Goi K.、Inaba T.、Lenny N.T.、Downing J.R.、Stifani S.、Look A.T.：“e2a-hlf 癌蛋白激活 groucho 相关基因并抑制 runx1”Mol。