リゾチーム〜α-ラクトアルブミンの折りたたみ中間体の構造と物性

溶菌酶和α-乳清蛋白折叠中间体的结构和物理性质

基本信息

批准号：
01J10878
负责人：
小橋川敬博
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度はイヌミルクリゾチーム(Canine Milk Lysozyme : CML)のMolten Globule(MG)状態のnon-native helix構造に関する研究を行った。これまでの研究から、CMLのMG状態においてα-helixに特有な222nmの楕円率の絶対値がNative(N)状態よりも大きく、MG状態のhelix含量がN状態よりも多くなっていることが示されていた。しかしながら、どの部分がMG状態においてhelixを形成するのかは明らかにはされていなかった。本研究において、helical propensityを予測するプログラムであるAGADIRによって、N状態ではβ-sheetを形成している領域内にhelixを形成し易い領域が存在していることが見出され、その領域がMG状態においてhelixを形成している可能性が示唆された。そこで、その領域内の1残基をhelix-breakerであるプロリンに置換した変異体(Q58P)を作成することでnon-native helix構造の存在について検討を行った。その結果、変異体のMG状態における222nmの楕円率の絶対値が野生型よりも小さくなり、58番目周辺が天然状態ではβ-sheetを形成しているがMG状態においてはhelixを形成していることが示された。また、変性実験の結果より58番目周辺のhelix構造はMG状態の形成および安定性には寄与しないことが示され、58番目周辺のhelix構造は非協同的相互作用により形成されていることが示唆された。そこで、この部分に対応するペプチドモデルを作成し、この部分のMG状態のおける3次元分子構造に関する検討をNMR法を用いて行った。研究成果については現在論文執筆中である。

今年，我们对犬牛奶溶菌酶（CML）的非本地螺旋结构进行了一项研究。先前的研究表明，222 nm的椭圆度的绝对值（在α-螺旋中是独有的）大于天然（n）状态，并且Mg状态的螺旋含量大于N状态。但是，目前尚不清楚MG状态下哪些部分形成螺旋。在这项研究中，预测螺旋倾向的程序Agadir发现，在n个状态下形成β-折叠的区域中可能存在一个可能形成螺旋的区域，这表明该区域可能在mg状态下形成螺旋。因此，我们通过创建一个突变体（Q58p）来研究了非本地螺旋结构的存在，在该突变体（Q58P）中，该区域的一个残基被螺旋断裂脯氨酸取代。结果表明，在突变体的毫克状态下，椭圆率在222 nm处的绝对值小于野生型的绝对值，并且第58个周围在天然状态中形成β-片，但在毫克状态下螺旋。此外，变性实验的结果表明，在第58位周围的螺旋结构没有促进MG状态的形成和稳定性，这表明第58位周围位置周围的螺旋结构是由非合作相互作用形成的。因此，创建了与该部分相对应的肽模型，并使用NMR研究了该部分的Mg状态中的3D分子结构。他目前正在撰写有关他的研究结果的论文。