中心体複製のメカニズムの解明

阐明中心体复制机制

• 批准号: 12878138
• 负责人: 戸所 一雄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878138/
• 关键词: 中心体; Cdk2-Cyclin E

中心体が複製されるにはCdk2-Cyclin Eが活性化されることが必要であることが最近判明したので、本研究では、Cdk2-Cyclin Eによってリン酸化される中心体構成蛋白質である基質を単離同定し、そのシグナル伝達経路と中心体複製の分子メカニズムを解明することを試みた。G1/S期に同調させたヒトHeLa細胞から中心体を精製し、バキュロで産生した活性化Cdk2-Cyclin Eによってリン酸化される中心体蛋白質を2Dゲルから単離し、そのアミノ酸配列を決定した。この時点で米国のグループが全く同じ方法によって同じ蛋白質NPM/B23を単離同定し、その特異的抗体の作成から局在と、中心体複製における機能の重要性をCellに発表した。そこで本研究としては、中心体複製の分子メカニズムの解析を行う為にNPM/B23の詳細な作用機序を現在解析中である。リン酸化部位を変異させた基質蛋白質を用いた解析、抗体による中心体複製への効果を調べている。さらにNPM/B23と相互作用する下流蛋白質を同定するために、pull down実験やtwo hybrid法を用いて単離同定を行っている。

由于最近发现CDK2-周期蛋白E需要复制中心体的激活，因此在这项研究中，我们隔离并鉴定了一种底物，一种由CDK2-周期蛋白E磷酸化的中心体成分蛋白质，并试图阐明其信号传导途径和中心元素的分子机制。从G1/s相同步的人类HeLa细胞中纯化中心体，并从2D凝胶中分离出在Baculo中产生的活化的CDK2-循环磷酸化的中心体蛋白，并确定其氨基酸序列。在这一点上，一个美国组以完全相同的方式隔离并鉴定出相同的蛋白质NPM/B23，并从创建其特定抗体及其在中心体复制中的功能中提出了其定位的重要性。因此，在这项研究中，我们目前正在分析NPM/B23的详细作用机理，以分析中心体复制的分子机制。研究了使用具有突变磷酸化位点的底物蛋白的分析，并研究了抗体对中心体复制的影响。此外，为了鉴定与NPM/B23相互作用的下游蛋白，我们使用了下拉实验和两种混合方法进行了隔离和鉴定。

项目成果

永田由香,戸所一雄: "血液・腫瘍科「MAPKとアポトーシス」"科学評論社. (2000)

Yuka Nagata、Kazuo Todokoro：“血液学/肿瘤学‘MAPK 和细胞凋亡’” Kagaku Hyoronsha (2000)。

Nagata,Y. ら: "A novel regulator of G-protein signaling bearing GAP activity for Gαi and Gαq in megakaryocytes"Blood. (印刷中). (2001)

Nagata, Y. 等人：“巨核细胞中具有 Gαi 和 Gαq 活性的 G 蛋白信号传导的新型调节剂”（正在出版）。

Sugata,N. ら: "Human CENP-H multimers colocalize with CENP-A and CENP-C at active centromere-kinetochore complexes."Hum.Mol.Genet.. 9. 2919-2926 (2000)

Sugata, N. 等人：“人类 CENP-H 多聚体与 CENP-A 和 CENP-C 在活性着丝粒-动粒复合物上共定位。”Hum.Mol.Genet.. 9. 2919-2926 (2000)

永田由香,戸所一雄: "分子細胞治療「赤血球/巨核球の分化制御シグナル」"先端医学社(印刷中). (2001)

Yuka Nagata、Kazuo Todokoro：“分子细胞疗法“红细胞/巨核细胞分化控制信号””Senshin Igakusha（出版中）。