造血幹細胞増殖因子の同定と造血幹細胞のex vivo培養法の確立

造血干细胞生长因子的鉴定及造血干细胞离体培养方法的建立

基本信息

批准号：
12036226
负责人：
戸所一雄
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12036226/
关键词：
幹細胞造血自己複製因子

项目摘要

造血幹細胞のself-renewal(自己複製)因子(膜蛋白質)の同定による造血幹細胞のex vivo培養増幅法の確立を目指して、マウス造血幹細胞の性状解析を行い以下の点を明らかにした。(1)最近Peschleらはヒト骨髄中のCD34^+Flk1^+細胞が造血幹細胞であると報告した。しかし、マウス骨髄中にはCD34^+Flk1^+細胞は極少数しか存在せず、Hoechst33342^-細胞(SP細胞)とは重複分画ではなかった。マウスSP細胞(Hoechst^-Rhodamine^-細胞)は放射線照射マウスで造血再構成ができたものの、マウスCD34^+Flk1^+細胞は出来なかった。従ってマウスではCD34^+Flk1^+細胞は造血幹細胞ではないと考えられた。(2)マウス骨髄Hoechst^-Rhodamine^-細胞(SP細胞)を、あるストローマ細胞上で何らサイトカインを添加することなく共培養行った。その結果6ヶ月以上に渡りcobble stone様コロニーを形成しながら長期培養増幅することが可能であった。増幅した細胞集団の中には、SP細胞もLin^-Scal^+c-Kit^+CD34^-細胞もLin^-Scal^+cKit^+CD34^+細胞も存在が確認できた。従ってマウス造血幹細胞のex vivo培養が特定条件下では可能と考えられた。(3)長期共培養した後単離したSP細胞を再びストローマ細胞上で共培養してもcobble stone様コロニーはできなかった。しかし長期培養後のLin^-Scal^+c-Kit^+CD34^-細胞やLin^-Scal^+cKit^+CD34^+細胞ではcobble stone様コロニー形成が再び可能であった。これら長期培養後の各細胞分画で造血再構成実験を行ったところ、SP細胞では再構成が不可能であったが、Lin^-Scal^+cKit^+CD34^+細胞では現在のところ再構成可能であると判断ている。現在長期再構成能について調べている。このストローマ細胞には造血幹細胞をex vivoで増幅維持する能力があると考えられた。現在このcDNAライブラリーから造血幹細胞の自己複製因子の発現クローニングを行っている

为了通过鉴定造血干细胞中的自我更新（膜蛋白）来建立造血干细胞的离体培养扩增方法，我们分析了小鼠造血干细胞的特性并揭示了以下几点。（1）最近，Peschle等。报道人骨髓中的CD34^+ FLK1^+细胞是造血干细胞。但是，在小鼠的骨髓中只有很少的CD34^+ FLK1^+细胞，而与Hoechst333342^ - 细胞（SP细胞）相比，这并不是重复的部分。尽管小鼠SP细胞（Hoechst^-Rhodamine^ - 细胞）能够在辐射诱导的小鼠中造血重建，但小鼠CD34^+ FLK1^+细胞是不可能的。因此，CD34^+ FLK1^+细胞不被认为是小鼠中的造血干细胞。（2）小鼠骨髓hoechst^-Rhodamine^-cells（Sp细胞）在某些基质细胞上共培养，而无需添加任何细胞因子。结果，可以放大长期培养物，同时形成类似鹅卵石的菌落超过6个月。在扩增的细胞群体中，SP细胞的存在，lin^-scal^+c-kit^+cd34^-cells和lin^-scal^+ckit^+ckit^+cd34^+细胞的存在。因此，在特定条件下认为小鼠造血干细胞的离体培养是可能的。（3）长期结合后，将分离的SP细胞再次在基质细胞上共培养，但没有卵石样菌落。然而，在长期培养后，在lin^-scal^+c-kit^+cd34^ - 和lin^-scal^+c-kit^+cd34^ - 和lin^+c-kit^+cd34^ - 和lin^-scal^+c-kit^+cd34^ - 中再次可能发生了类似卵石的菌落形成。在这些长期培养后，对每个细胞分数进行了造血重构实验，尽管SP细胞不可能进行重构，但确定目前使用Lin^-Scal^+CKIT^+CKIT^+CD34^+细胞可以进行重构。我们目前正在研究长期重建功能。这些基质细胞被认为具有扩增和维持造血干细胞的能力。当前，从这个cDNA文库中进行了造血干细胞的自我更新因子的表达克隆。