細胞分裂期での時期及び基質特異的ユビキチンリガーゼの活性化機構

细胞分裂阶段和底物特异性泛素连接酶的激活机制

基本信息

批准号：
11144244
负责人：
戸所一雄
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144244/
关键词：
APC 細胞分裂

项目摘要

細胞分裂期の時期特異的および基質特異的な細胞分裂制御因子のユビキチン依存的な蛋白質分解は、細胞分裂期の後戻り出来ない進行を制御する為に大変重要である。細胞分裂期特異的なユビキチンリガーゼAPCの時期特異性、基質特異的な選択的蛋白質分解の制御機序とそれによる細胞分裂期進行の制御を分子レベルで解析した。1)LokではなくSlkによってPlkがリン酸化活性化され、その結果APCを特異的にリン酸化し活性を制御することが判明した。2)Gl/S期やらDNA damage checkpointを制御するChklがSecurin/PTTGをリン酸化し、その結果APCによるユビキチン化反応に影響を与えspindlecheckpointを制御していることが判明した。3)同様にChklがcytokinesisを制御するAPCの基質であるAselを特異的にリン酸化することが判明し、cytokinesisを制御している可能性が示唆された。4)PlkやMPFによるAPCのリン酸化にSuclファミリーの存在が与える影響を調べたが、すっきりした結果を得られなかった。5)ヒトAPC中に分裂酵母だけで見いだされているAPCサブユニットDoclやAPCllのヒトホモログ遺伝子を単離し、その細胞内局在やAPCとの共存性、APC活性との関わりを調べた。これらは明らかにAPCのサブユニットであり、細胞内局在もAPCと基本的に同じであった。6)分裂期後期のリン酸化Cdhlを脱リン酸化するフォスファターゼとしてCdc14が考えられているが、実際にCdc14であることをin vitroでの脱リン酸化反応で確認した。

为了控制无法返回细胞分裂阶段进展的有丝分裂时间特异性和底物特异性细胞分裂调节剂的泛素依赖性蛋白水解非常重要。在分子水平上分析了细胞 - 细胞特异性泛素连接酶APC的定时特异性，底物特异性选择性蛋白水解调节的机制以及细胞 - 分离 - 蛋白质进展的调节。 1）发现PLK被SLK而非LOK磷酸化，因此特异性地磷酸化的APC并调节其活性。 2）发现CHKL控制了GL/S相和DNA损伤检查点，即磷酸化Securin/PTTG，它影响了APC和调节的SpindleCheckpoint的泛素化反应。 3）同样，发现CHKL特异性磷酸化ASEL，这是一种调节细胞因子的APC的底物，并建议它可以调节细胞因子。 4）我们研究了SUCL家族对PLK和MPF APC磷酸化的影响，但我们无法获得明确的结果。 5）仅在人APC中的裂变酵母中发现的APC亚基DOCL和APCLL的人类同源基因被分离出来，并研究了它们的亚细胞定位，与APC共存及其与APC活性的关系。这些显然是APC的亚基，它们的亚细胞定位基本与APC相同。 6）CDC14被认为是一种磷酸酶，在晚期有丝分裂阶段将磷酸化的CDHL去磷酸化，但通过体外去磷酸化反应证实了它实际上是CDC14。