腎癌の特異的腫瘍マーカーの開発およびその遺伝子治療の基礎的研究

肾癌特异性肿瘤标志物开发及基因治疗基础研究

• 批准号: 12217063
• 负责人: 林 辰弥
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217063/
• 关键词: 腎癌; プロテインCインヒビター; プラスミノゲンアクチベーター; 転写調節領域; Sp1結合部位; AP2結合部位

近年、我国においても腎癌の発生率は増加の-途にあり、その発生機序の解明、検査診断法および治療法の開発は重要かつ緊急な社会的要請課題である。腎癌の発生機序については未だ不明な点が多く、腎癌の腫瘍マーカーさらにはその治療法に関しても未だ確立されていない。我々は、最近、腎癌患者の摘出癌部では非癌部に比較してプロテインCインヒビター(PCI)の発現が著しく低下していることを見い出した。PCIは、肝臓や腎臓で産生される血漿セリンプロテアーゼインヒビター(セルピン)の一つで、癌の浸潤・転移に密接に関与するウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベーター(uPA)を阻害することが知られている。このような背景の基、本年度は、腎癌におけるPCI発現低下機序の解明のために、腎近位尿細管上皮細胞におけるPCIの転写調節領域に関して検討を行うと共に、癌の浸潤におけるPCIの役割に関しても検討を行った。まずはじめに、腎臓における主要な産生細胞である腎近位尿細管上皮細胞におけるPCIの転写調節領域をルシフェラーゼをレポーター遺伝子として解析した結果、そのプロモーター領域としてはSp1結合部位が、エンハンサー領域としてはAP2結合部位が重要であることが明らかになった。次に、腎臓癌細胞の浸潤・転移におけるPCIの影響について、マトリゲルを用いたin vitro癌細胞浸潤モデルを用いて検討を行った。その結果、PCIは株化腎癌細胞であるCaki-1細胞のマトリゲルへの浸潤能を低下させることが明らかになった。次に、PCIを強制発現させたCaki-1細胞を作製し、その浸潤能の変化を同様に検討したところ、PCIcDNAを含まない発現ベクターを挿入して作製したPCI非発現Caki-1細胞(Caki-Mock細胞)に比較してPCIcDNAを含む発現ベクターを挿入して作製したPCI強制発現Caki-1細胞(Caki-PCI細胞)の浸潤能は著しく低下することが明らかになった。また、Caki-PCI細胞の培養上清中のuPA-PCI複合体は、Caki-Mock細胞のそれに比較して著しく増加していることが明らかになった。

近年来，日本肾癌的发病率呈上升趋势，阐明其发生机制以及开发诊断和治疗方法是重要而紧迫的社会问题。肾癌的发生机制尚有许多未知数，肾癌的肿瘤标志物及其治疗方法尚未建立。我们最近发现，与非癌区域相比，肾癌患者切除的癌区域中蛋白C抑制剂（PCI）的表达显着减少。 PCI是肝脏和肾脏中产生的血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpins）之一，已知可以抑制尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA），而uPA与癌症的侵袭和转移密切相关。基于这样的背景，今年，为了阐明肾癌中PCI表达降低的机制，我们将研究肾近端肾小管上皮细胞中PCI的转录调控区域，并探讨PCI在肾癌侵袭中的作用。考虑了以下几点。首先，我们使用荧光素酶作为报告基因，分析了肾近端肾小管上皮细胞中PCI的转录调控区域，结果发现启动子区域是Sp1结合位点。增强子区域是 AP2 结合位点，这一点很明显。接下来，我们使用 Matrigel 建立体外癌细胞侵袭模型，研究 PCI 对肾癌细胞侵袭和转移的影响。结果显示，PCI 降低了 Caki-1 细胞（一种已建立的肾癌细胞系）侵入 Matrigel 的能力。接下来，我们生成了被迫表达PCI的Caki-1细胞，并类似地检查了其侵袭能力的变化，我们发现不表达PCI的Caki-1细胞（Caki揭示了强制表达PCI的侵袭能力。通过插入含有PCI cDNA的表达载体而产生的Caki-1细胞（Caki-PCI细胞）的表达显着低于Caki-1细胞（Caki-PCI细胞）。还发现，与 Caki-Mock 细胞相比，Caki-PCI 细胞培养上清液中的 uPA-PCI 复合物显着增加。

项目成果

Suzuki,K.and Hayashi,T.: "Cis-elements required for expression of human protein C inhibitor (PCI) gene in HepG2 cells and its androgen-dependent expression in rat reproductive organs."Sem.Thromb.Haemost.. 26. 75-83 (2000)

Suzuki,K. 和 Hayashi,T.：“HepG2 细胞中人蛋白 C 抑制剂 (PCI) 基因表达及其在大鼠生殖器官中雄激素依赖性表达所需的顺式元件。”Sem.Thromb.Haemost.. 26。

Watanabe,R., et al.: "Plasma levels of activated protein C-protein C inhibitor complex in patients with hypercoagulable states."Am.J.Hematol.. 65. 35-40 (2000)

Watanabe,R., et al.：“高凝状态患者中活化蛋白 C-蛋白 C 抑制剂复合物的血浆水平。”Am.J.Hematol.. 65. 35-40 (2000)

Ido,M., et al.: "Identification of a novel 33-kDa Ser/Thr kinase that phosphorylated the cytoplasmic tail of protease-activated receptor 1 (thrombin receptor) in human platelets."Thromb.Haemost.. 83. 617-621 (2000)

Ido,M., 等人：“鉴定一种新型 33-kDa Ser/Thr 激酶，该激酶磷酸化人血小板中蛋白酶激活受体 1（凝血酶受体）的胞质尾部。”Thromb.Haemost.. 83. 617-

Shimizu,S., et al.: "Thrombin stimulates the expression of PDGF in lung epithelial cells."Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.. 279. 503-510 (2000)

Shimizu,S., et al.：“凝血酶刺激肺上皮细胞中 PDGF 的表达。”Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.. 279. 503-510 (2000)