プロテインCインヒビター遺伝子の発現制御機構の研究-肝および生殖臓器における転写調節機構の解析-

Protein C抑制基因表达调控机制研究-肝脏及生殖器官转录调控机制分析-

• 批准号: 11780443
• 负责人: 林 辰弥
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11780443/
• 关键词: プロテインCインヒビター; 転写調節領域; 腎近位尿細管上皮細胞; Sp1結合部位; AP2結合部位; セリンプロテアーゼインヒビター; 活性化プロテインC; プラスミン; 反応部位; 線溶系

プロテインCインヒビター(PCI)は、主として肝臓で産生される血液凝固制御因子の活性化プロテインC(APC)に特異的な血漿阻害因子で、α1アンチトリプシンなどと相同な構造を有する血漿セリンプロテアーゼインヒビター(SERPIN)ファミリー蛋白質の1つである。また、PCIは尿中にもウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベーター(uPA)との複合体として存在し、尿中PCIは腎近位尿細管上皮細胞で産生されることが知られている。我々は、これまでに本奨励研究の補助の基、肝癌由来株HepG2細胞でのPCIの発現とその制御に重要な転写調節領域を解析し、PCI遺伝子の肝における発現のプロモーター領域としてはSp1結合部位が、エンハンサー領域としてはAP2結合部位が、サイレンサー領域としてはA-activator結合部位およびインターフェロン-γ反応性領域が重要であることを報告してきた。本年度は、これまでの研究をさらに発展させ、腎近位尿細管上皮細胞におけるPCIの転写調節領域をルシフェラーゼをレポーター遺伝子として解析した。その結果、そのプロモーター領域としてはSp1結合部位が、エンハンサー領域としてはAP2結合部位が重要であることが明らかになった。また、1.6kbの5'上流およびポリA付加部位を含む約15kbのヒトPCI遺伝子をマウスの受精卵に導入して作製したヒトPCI遺伝子トランスジェニックマウスでは、機能を有するヒトPCIがその血漿中に存在し、そのマウスにおけるヒトPCImRNAの組織分布がヒトにおけるそれとほぼ一致することから、本実験で使用した約15kbのヒトPCI遺伝子上には、ヒトPCIの組織分布を規定するほぼすべてのシスエレメントが含まれることが明らかになった。また、本ヒトPCI遺伝子トランスジェニックマウスを用いて作成した種々の疾患モデルマウスは、ヒトPCIのin vivoでの発現変動の解析に有用であると考えられた。

蛋白C抑制剂（PCI）是针对活化蛋白C（APC）的血浆抑制剂，这是主要在肝脏中产生的血液凝结调节剂，并且是血浆蛋白蛋白酶蛋白酶抑制剂（SERPIN）家族蛋白之一，它们与α1抗抑制蛋白蛋白具有同源性。众所周知，PCI在尿液中作为与尿激酶型纤溶酶原激活剂（UPA）的复合物存在，并且在近端肾小管上皮细胞中产生尿PCI。 We have previously analyzed transcriptional regulatory regions important for the expression of PCI in liver cancer-derived strain HepG2 cells, supporting this encouragement study, and have reported that the Sp1 binding site is important for the promoter region of PCI gene expression in the liver, the AP2 binding site is important for the enhancer region, and the A-activator binding site and the interferon-γ reactive region are important for the silencer region.今年，我们进一步开发了先前的研究，并分析了使用荧光素酶作为报告基因的近端管状上皮细胞中PCI的转录调节区域。结果，揭示了SP1结合位点对启动子区域很重要，并且AP2结合位点对于增强子区域很重要。 Furthermore, in human PCI gene transgenic mice produced by introducing approximately 15 kb of human PCI gene, which contains a 1.6 kb upstream human PCI gene and containing a polyA addition site of 5', into a fertilized mouse, functional human PCIs are present in the plasma, and the tissue distribution of human PCI mRNA in the mouse is almost identical to that in humans, and it was revealed that almost all cis elements该实验中使用的大约15 kb的人PCI基因中包括人类PCI的组织分布。此外，使用人PCI基因转基因小鼠产生的各种疾病模型小鼠被认为对分析体内人类PCI表达的变化很有用。

项目成果

Ido,M.,et al.: "Thrombin receptor-associated 33-kDa serine/threonine kinase phosphorylates the cytoplasmic tail if thrombin receptor in human platelets"Thromb.Haemost.. (in press). (2000)

Ido,M.,et al.：“凝血酶受体相关的 33-kDa 丝氨酸/苏氨酸激酶磷酸化细胞质尾部（如果人血小板中的凝血酶受体）”Thromb.Haemost..（出版中）。

Shimizu,S., et al.: "Thrombin stimulates the expression of PDGF in lung epithelial cells."Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.. 279. 503-510 (2000)

Shimizu,S., et al.：“凝血酶刺激肺上皮细胞中 PDGF 的表达。”Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.. 279. 503-510 (2000)

Suzuki,K.and Hayashi,T.: "Cis-elements required for expression of human protein C inhibitor (PCI) gene in HepG2 cells and its androgen-dependent expression in rat reproductive organs"Sem.Thromb.Hemost.. (in press). (2000)

Suzuki,K. 和 Hayashi,T.：“HepG2 细胞中人蛋白 C 抑制剂 (PCI) 基因表达所需的顺式元件及其在大鼠生殖器官中的雄激素依赖性表达”Sem.Thromb.Hemost..（出版中）

Watanabe,R., et al.: "Plasma levels of activated protein C-protein C inhibitor complex in patients with hypercoagulable states."Am.J.Hematol.. 65. 35-40 (2000)

Watanabe,R., et al.：“高凝状态患者中活化蛋白 C-蛋白 C 抑制剂复合物的血浆水平。”Am.J.Hematol.. 65. 35-40 (2000)

Hayashi,T.,et al.: "Organization and chromosomal localization of the human endothelial protein C receptor gene"Gene. 238. 367-373 (1999)

Hayashi,T.,et al.：“人内皮蛋白 C 受体基因的组织和染色体定位”基因。