プロテインCインヒビター遺伝子の肝および生殖系細胞における発現調節機構の研究

肝及生殖细胞中Protein C抑制基因表达调控机制研究

• 批准号: 07780509
• 负责人: 林 辰弥
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780509/
• 关键词: プロテインCインヒビター; 活性化プロテインC; セリンプロテアーゼインヒビター; 男性不妊症; 受精; 発現調節領域; 転写因子

プロテインCインヒビター(PCI)は血液凝固制御因子の活性化プロテインC(APC)に特異的な血漿阻害因子で、α1アンチトリプシンなどと相同な構造を有する血漿セリンプロテアーゼインヒビター(SERPIN)ファミリー蛋白質の1つである。また、PCIは精漿中に血漿中の約40倍も高濃度に存在し、男性不妊症患者精漿中では著しく低下していること、また精子の突体にも存在し、卵との受精に関わっていることが示唆されている。昨年度は本奨励研究の補助の基、PCI遺伝子の肝臓における発現調節領域としては、ヒトPCI遺伝子の5'上流領域(約1.6kb)中のSp1、2個のAP2および1個の逆向きのAP2結合部位を含む転写開始点の上流450bpの領域が重要であることをルシフェラーゼ(Luc)をレポーター遺伝子として明らかにした。本年度はこの研究をさらに発展させた結果、PCIの肝臓における発現の主要なプロモーター領域はSp1結合部位であり、2個のAP結合部位のうち、Sp1結合部位より上流側のAP2結合部位はエンハンサーとして機能し、下流側のAP2結合部位はサイレンサーとして機能することから明らかになった。さらに逆向きのAP2結合部位は機能していないこと、PCI遺伝子のSp1結合部位より上流には、少なくとも2個のサイレンサー領域が存在することが明らかになった。また、このSp1結合部位に対する肝細胞核蛋白質の結合もゲル移動度シフトアッセイにより確認された。以上の結果から、肝細胞核由来のSp1様の蛋白質がこの領域に結合することによりPCIの肝臓における発現を調節していることが明らかになった。現在、PCIを発現する生殖臓器由来の株化細胞や腎臓由来の株化細胞を検索し、それらを用いて同様の解析を行い、PCI遺伝子上の組織特異的発現調節領域の同定を試みている。

蛋白C抑制剂（PCI）是血浆抑制剂，特异性蛋白C（APC），一种血液凝结调节剂，是血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂（SERPIN）家族蛋白之一，它们具有与α1抗胰蛋白酶等同源的结构。此外，PCI存在于血浆中的浓度高约40倍，在血浆中的浓度高约40倍，男性不育患者的精液血浆中显着降低，并且也存在于精子手术中，这表明它与卵子有关。去年，作为这项激励研究的支持者，我们透露，作为记者基因，该地区的转录起源上游为450 bp的区域，包括SP1，两个AP2和一个反向AP2结合位点，对于肝脏PCI基因的PCI基因的表达调节区域很重要（大约1.6 kb）（大约1.6 kb）。今年，这项研究的进一步发展表明，肝脏中PCI表达的主要启动子区域是SP1结合位点，在两个AP结合位点中，从SP1结合位点上游的AP2结合位点起到增强剂的作用，而下游AP2 AP2结合位点功能作为沉积体。此外，揭示了反向的AP2结合位点不起作用，并且PCI基因的SP1结合位点上游至少存在两个消音器区域。凝胶迁移率转移测定法也证实了肝细胞核蛋白与该SP1结合位点的结合。以上结果表明，源自肝细胞核得出的SP1样蛋白通过与该区域结合来调节PCI的肝脏表达。当前，我们搜索源自生殖器官的细胞系，这些器官表达肾脏的PCI和细胞系，并使用它们进行类似的分析来识别PCI基因上组织特异性表达调节区域。

项目成果

Yasuda, H., Hayashi, T., Nishioka, J., and Suzuki, K.: "Mokecular cloding and functional characterization of rat plasma protein S." J. Biochem.117. 374-383 (1995)

Yasuda, H.、Hayashi, T.、Nishioka, J. 和 Suzuki, K.：“大鼠血浆蛋白 S 的分子克隆和功能表征。”

Mizutani, H., Hayashi, T., Suzuki, K., et al.: "Functional and immunoreactive thrombomodulin expressed keratiocytes." J. Invest. Dermatol.103. 825-828 (1994)

Mizutani, H.、Hayashi, T.、Suzuki, K.等人：“功能性和免疫反应性血栓调节蛋白表达的角质形成细胞。”

Ohiwa, M., Hayashi, T., Suzuki, K., et al.: "Factor VII Mie: homozygous asymptomatic type I deficiency caused by an amino acid substitution of His(CAC)for Arg(247)(CGC)in the catalytic domain." Thromb. Haemostas.71. 773-777 (1994)

Ohiwa, M.、Hayashi, T.、Suzuki, K. 等人：“因子 VII Mie：由 His(CAC) 取代 Arg(247)(CGC) 引起的纯合无症状 I 型缺陷

Tamei, H., Hoshino, T., Hayashi, T., et al.: "One-step sandwich enzyme immunoassay for human C4b-binding protein(C4BP)and protein S-C4BP complex using monoclonal antibodies." Clin. Chim. Acta. 234. 115-125 (1995)

Tamei, H.、Hoshino, T.、Hayashi, T. 等人：“使用单克隆抗体对人 C4b 结合蛋白 (C4BP) 和蛋白 S-C4BP 复合物进行一步夹心酶免疫测定。”

Hayashi, T., Nishioka, J., and Suzuki, K.: "Molecular mechanism of dysfunctional proteins S Tokishima(Lys155-Glu)for the regulation of the blood coagulation system." Biochim. Biophys. Acta. 1272. 159-167 (1995)

Hayashi, T.、Nishioka, J. 和 Suzuki, K.：“功能失调蛋白 S Tokishima (Lys155-Glu) 调节凝血系统的分子机制。”