プロテインCインヒビター遺伝子の肝および生殖系細胞における発現調節機構の研究

肝及生殖细胞中Protein C抑制基因表达调控机制研究

• 批准号: 07780509
• 负责人: 林 辰弥
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780509/
• 关键词: プロテインCインヒビター; 活性化プロテインC; セリンプロテアーゼインヒビター; 男性不妊症; 受精; 発現調節領域; 転写因子

プロテインCインヒビター(PCI)は血液凝固制御因子の活性化プロテインC(APC)に特異的な血漿阻害因子で、α1アンチトリプシンなどと相同な構造を有する血漿セリンプロテアーゼインヒビター(SERPIN)ファミリー蛋白質の1つである。また、PCIは精漿中に血漿中の約40倍も高濃度に存在し、男性不妊症患者精漿中では著しく低下していること、また精子の突体にも存在し、卵との受精に関わっていることが示唆されている。昨年度は本奨励研究の補助の基、PCI遺伝子の肝臓における発現調節領域としては、ヒトPCI遺伝子の5'上流領域(約1.6kb)中のSp1、2個のAP2および1個の逆向きのAP2結合部位を含む転写開始点の上流450bpの領域が重要であることをルシフェラーゼ(Luc)をレポーター遺伝子として明らかにした。本年度はこの研究をさらに発展させた結果、PCIの肝臓における発現の主要なプロモーター領域はSp1結合部位であり、2個のAP結合部位のうち、Sp1結合部位より上流側のAP2結合部位はエンハンサーとして機能し、下流側のAP2結合部位はサイレンサーとして機能することから明らかになった。さらに逆向きのAP2結合部位は機能していないこと、PCI遺伝子のSp1結合部位より上流には、少なくとも2個のサイレンサー領域が存在することが明らかになった。また、このSp1結合部位に対する肝細胞核蛋白質の結合もゲル移動度シフトアッセイにより確認された。以上の結果から、肝細胞核由来のSp1様の蛋白質がこの領域に結合することによりPCIの肝臓における発現を調節していることが明らかになった。現在、PCIを発現する生殖臓器由来の株化細胞や腎臓由来の株化細胞を検索し、それらを用いて同様の解析を行い、PCI遺伝子上の組織特異的発現調節領域の同定を試みている。

蛋白C抑制剂（PCI）是一种凝血调节剂活化蛋白C（APC）特异性的血浆抑制剂，是血浆丝氨酸蛋白酶抑制剂（SERPIN）家族蛋白的成员，其结构与α1抗胰蛋白酶同源。是。另外，精浆中的PCI浓度比血浆高约40倍，并且已发现男性不育患者的精浆中的浓度显着降低，这表明与此有关。去年，在这项推广研究的支持下，我们利用人类PCI基因5'上游区域（约1.6 kb）的Sp1、两个AP2和一个AP2作为PCI基因在肝脏中的表达调控区域。荧光素酶（Luc）作为报告基因，我们发现转录起始点上游的 450 bp 区域（包括结合位点）很重要。今年，我们进一步开展了这项研究，发现肝脏中PCI表达的主要启动子区域是Sp1结合位点，而在两个AP结合位点中，Sp1结合位点上游的AP2结合位点起到增强子的作用。结果表明，下游侧的AP2结合位点起到沉默子的作用。此外，还发现相反方向的AP2结合位点不起作用，并且PCI基因的Sp1结合位点上游至少存在两个沉默区域。此外，通过凝胶迁移率变动测定证实了肝细胞核蛋白与该Sp1结合位点的结合。上述结果表明，源自肝细胞核的Sp1样蛋白通过与该区域结合来调节肝脏中PCI的表达。目前，我们正在寻找表达 PCI 的生殖器官来源的细胞系和肾脏来源的细胞系，并利用它们进行类似的分析，试图识别 PCI 基因的组织特异性表达调控区域。

项目成果

Yasuda, H., Hayashi, T., Nishioka, J., and Suzuki, K.: "Mokecular cloding and functional characterization of rat plasma protein S." J. Biochem.117. 374-383 (1995)

Yasuda, H.、Hayashi, T.、Nishioka, J. 和 Suzuki, K.：“大鼠血浆蛋白 S 的分子克隆和功能表征。”

Mizutani, H., Hayashi, T., Suzuki, K., et al.: "Functional and immunoreactive thrombomodulin expressed keratiocytes." J. Invest. Dermatol.103. 825-828 (1994)

Mizutani, H.、Hayashi, T.、Suzuki, K.等人：“功能性和免疫反应性血栓调节蛋白表达的角质形成细胞。”

Ohiwa, M., Hayashi, T., Suzuki, K., et al.: "Factor VII Mie: homozygous asymptomatic type I deficiency caused by an amino acid substitution of His(CAC)for Arg(247)(CGC)in the catalytic domain." Thromb. Haemostas.71. 773-777 (1994)

Ohiwa, M.、Hayashi, T.、Suzuki, K. 等人：“因子 VII Mie：由 His(CAC) 取代 Arg(247)(CGC) 引起的纯合无症状 I 型缺陷

Tamei, H., Hoshino, T., Hayashi, T., et al.: "One-step sandwich enzyme immunoassay for human C4b-binding protein(C4BP)and protein S-C4BP complex using monoclonal antibodies." Clin. Chim. Acta. 234. 115-125 (1995)

Tamei, H.、Hoshino, T.、Hayashi, T. 等人：“使用单克隆抗体对人 C4b 结合蛋白 (C4BP) 和蛋白 S-C4BP 复合物进行一步夹心酶免疫测定。”

Tanigawa, M., Wada H., Hayashi, T., et al.: "Decreased protein C inhibitor after percutaneous transluminal coronary angioplasy in patients with acute myocardisl infarction." Am. J. Hematol.49. 1-5 (1995)

Tanikawa, M.、Wada H.、Hayashi, T. 等人：“急性心肌梗死患者经皮腔内冠状动脉血管成形术后蛋白 C 抑制剂的减少。”