Wntシグナル関連分子の単離および発生・発癌における機能解析

Wnt信号相关分子的分离及发育和癌变中的功能分析

• 批准号: 12215155
• 负责人: 八尾 良司
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215155/
• 关键词: Wntシグナル; Frizzled; PDZ domain; ノックアウトマウス

我々が独自に見いだした新規frizzled結合分子、fzip-1、は、培養細胞内ではゴルジ体に存在し、またfrizzledとの共発現などの一連の実験から、ゴルジ体からの物質輸送に関与している可能性が示唆された。そこで生体内でのfzip-1の機能を解析するため、fzip-1ノックアウトマウスを作成・解析した結果、fzip-1欠損マウスの雄が不妊であることが明らかとなった。電子顕微鏡による詳細な解析により、fzip-1欠損マウスでは、ゴルジ体から先体への物質輸送阻害が原因であると思われる先体の形成不全が観察された。このことは、fzip-1がfrizzledの輸送に係わるのみでなく、他の分子の輸送にも関与していることを示している。一方、frizzledの細胞膜における局在は、frizzledが細胞極性を制御する上で重要であると考えられることから、fzip-1欠損細胞におけるfrizzledの細胞内局在に興味が持たれる。一方、frizzledのさらなる機能解析のために、他のファミリーメンバーに結合する分子の同定を行った。その結果、新たに2つの分子を同定し、fzip-2およびfzip-3とした。fzip-2は、frizzled4、7に結合し、fzip-3はfrizzled3、7に結合した。fzip-2は複数のPDZ domainを有しており、HAタグを導入したfzip-2の細胞内への導入の結果、主に細胞膜に局在することが明らかとなった。またfzip-3はcoiled-coil motifと特徴的な24アミノ酸からなる7つの繰り返し配列を有し、細胞質に局在していた。これらの結果は、我々が同定した3つのfrizzled結合分子が、それぞれ異なった機能を担っていることを示しており、その解析に興味が持たれる。

我们独立发现了一种新的卷曲结合分子fzip-1，存在于培养细胞的高尔基体中，并且包括与卷曲共表达在内的一系列实验表明，它参与了高尔基体的物质运输。可能有。因此，为了分析fzip-1在体内的功能，我们创建并分析了fzip-1敲除小鼠，结果明确了fzip-1缺陷的雄性小鼠不育。使用电子显微镜的详细分析表明，fzip-1缺陷的小鼠存在顶体形成缺陷，这似乎是由于从高尔基体到顶体的物质运输受到抑制所致。这表明fzip-1不仅参与卷曲分子的转运，还参与其他分子的转运。另一方面，fzip-1缺陷细胞中卷曲的细胞内定位是令人感兴趣的，因为细胞膜中卷曲的定位被认为对于控制细胞极性很重要。同时，为了进一步分析卷曲的功能，我们鉴定了与其他家族成员结合的分子。结果，鉴定出两个新分子，命名为fzip-2和fzip-3。 fzip-2 绑定到 frizzled4,7，fzip-3 绑定到 frizzled3,7。 fzip-2具有多个PDZ结构域，通过将HA标记的fzip-2引入细胞中，结果表明其主要定位于细胞膜中。此外，fzip-3 具有卷曲螺旋基序和由 24 个氨基酸组成的特征性七重复序列，并且位于细胞质中。这些结果表明我们鉴定的三种卷曲结合分子具有不同的功能，并且它们的分析很有趣。