哺乳類動物におけるWntシグナルの機能解析

哺乳动物 Wnt 信号的功能分析

• 批准号: 10152260
• 负责人: 八尾 良司
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152260/
• 关键词: Wntシグナル; frizzled; APC; β-カテニン

APC遺伝子の変異による発癌機構おけるwntシグナルの役割を解析する目的で、β-カテニンの動態およびTCF/lef依存性の転写活性を、大腸腺腫および大腸癌由来細胞株で検討した。その結果、すべての大腸癌由来細胞株においてβ-カテニンが細胞質および核内に蓄積しているのに対し、大腸腺腫由来細胞株においては、β-カテニンは細胞接着面に存在し正常上皮細胞との顕著な違いは観察されなかった。一方ルシフェラーゼアッセイのより測定されたTCF/lef依存性転写活性では、大腸癌由来細胞株においては正常上皮細胞の20-50倍程度の高い値を示したが、大腸腺腫由来細胞株においては、3倍程度の値を示した。これらの結果は、TCF/lef依存性転写活性が、正常上皮細胞から大腸腺腫さらに大腸癌への移行と相関していることを示している。さらに正常APCタンパク質を保持している293細胞にWnt3a遺伝子またはβ-カテニンを導入するとTCF/lef依存性転写活性が上昇することを見いだした。現在これらの系を用いて、WntシグナルのAPC遺伝子の変異による腫瘍発生機構との関係についてさらに詳細な解析を進めている。一方、wntタンパク質受容体であるfrizzledタンパク質の機能を解析する目的で、酵母のtwo hybrid法を用いてfrizzledタンパク質と相互作用する分子の同定を試みた。その結果、frizzled5およびfrizzled8タンパク質と相互作用する新規タンパク質fzipを同定した。fzipタンパク質はPDZ domainとcoiled-coil motifを有する455アミノ酸をコードするタンパク質であり、fzipタンパク質の機能解析によりWntシグナルの同定およびその腫瘍発生過程への寄与の検討を試みている。

为了分析Wnt信号在APC基因中突变引起的致癌作用中的作用，在源自结肠腺瘤和结肠癌的细胞系中检查了β-catenin和TCF/LEF依赖性转录活性的动力学。结果，在所有结肠癌衍生的细胞系中，β-catenin在细胞质和核中积聚，而在细胞粘附表面存在β-catenin，在细胞腺瘤衍生的细胞系中观察到与正常上皮细胞的显着差异。另一方面，在结肠癌衍生的细胞系中，荧光素酶测定法的TCF/LEF依赖性转录活性较高，比正常上皮细胞高约20-50倍，而在结肠腺瘤衍生的细胞系中的值高约3倍。这些结果表明，TCF/LEF依赖性转录活性与从正常上皮细胞到结肠腺瘤和结肠癌的过渡相关。此外，我们发现当将Wnt3a基因或β-catenin引入携带正常APC蛋白的293个细胞中时，TCF/LEF依赖性转录活性增加。我们目前正在使用这些系统进一步详细分析Wnt信号与APC基因突变引起的肿瘤发育机制之间的关系。另一方面，为了分析Wnt蛋白受体（毛躁蛋白）的功能，我们尝试使用两种杂种酵母方法鉴定与毛躁蛋白相互作用的分子。结果，我们确定了一种新型的蛋白质FZIP，该蛋白质与毛躁5和毛躁8蛋白相互作用。 FZIP蛋白是一种具有PDZ结构域和盘绕蛋白基序的455个氨基酸的蛋白质，我们正在尝试通过对FZIP蛋白的功能分析来识别Wnt信号并研究其对肿瘤发育的贡献。