新しい手法による癌の浸潤・転移規定遺伝子の同定-マイクロディセクションとDNAマイクロアレイの併用-

使用新方法鉴定调节癌症侵袭和转移的基因 - 显微切割和 DNA 微阵列相结合 -

基本信息

批准号：
12215116
负责人：
森正樹
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215116/
关键词：
DNAマイクロアレイ LCM Cancer Chip 癌の悪性度原発巣転移巣 T7 poluymerase

项目摘要

【目的】レーザー顕微鏡下マイクロダイセクション(LCM)法とDNAマイクロアレイにてで病理組織切片から癌細胞のみを解析した。【方法と結果】胃癌3例大腸癌3例の癌部、非癌部、および転移巣より総計18検体採取した。各検体20枚ずつ(合計360枚)の凍結切片を作成し、LM200(OLYMPUS)を用いて目的の細胞のみを一検体につき百から1万個採取した。mRNAはT7poluymeraseにて増幅した。(1)癌部と非癌部の比較;癌部において過剰発現していた遺伝子は細胞周期関連遺伝子としてRB protein、MAP kinase、neutrophic tyrosine kinase、増殖因子としてInsulin like growth factor 2、Platelet derived growth factor(PDGF)等であった。(2)転移巣と原発巣の比較:転移巣において過剰発現していた遺伝子は細胞周期関連遺伝子としてtyrosine kinase2、蛋白分解酵素関連遺伝子としてcollagen type III-α、増殖因子としてPDGF、転写因子としてEukaryotic translation initiation factor-2、接着因子としてCadherin等が認められた。これらの既知の遺伝子およびESTについては発現差を確認した。(3)原発巣-転移巣間の発現プロファイルと生検標本との比較:生検標本においても同様の発現パターンの所見が見られた。【結論】LCMおよびDNAマイクロアレイを用いたことから、in vivo環境下で細胞の混入無く癌化あるいは転移において重要な遺伝子群を精確に同定し得た。また、その結果得られた発現プロファイルは生検標本から得られたそれと相関関係にあり、LCMおよびDNAマイクロアレイを用いた生検標本の評価は癌の悪性度あるいは転移の予測をする上で極めて臨床的に有用であることが示された。

[目的] 使用激光显微切割（LCM）和 DNA 微阵列仅对病理组织切片中的癌细胞进行分析。 [方法与结果]共采集3例胃癌、3例结直肠癌的癌变区、非癌区及转移灶标本18份。每个样品制备20片（总共360片）冰冻切片，并使用LM200（OLYMPUS）从每个样品仅收集100至10,000个感兴趣的细胞。用T7聚合酶扩增mRNA。 (1)癌变和非癌变区域的比较；癌变区域过表达的基因包括RB蛋白、MAP激酶、中性粒细胞酪氨酸激酶等细胞周期相关基因，以及胰岛素样生长因子2、血小板等生长因子衍生生长因子（PDGF）等(2)转移病灶与原发病灶的比较：转移病灶中过表达的基因为细胞周期相关基因酪氨酸激酶2、蛋白酶相关基因III-α型胶原、生长因子PDGF、真核细胞观察到转录因子、翻译起始因子-2 和粘附因子，例如钙粘蛋白。我们确认了这些已知基因和 EST 的差异表达。 (3)原发灶和转移灶与活检标本之间表达谱的比较：在活检标本中观察到相似的表达模式。 [结论]通过使用LCM和DNA微阵列，我们能够在体内环境中准确识别在致癌或转移中重要的基因组，而不污染细胞。此外，获得的表达谱与从活检标本获得的表达谱相关，并且使用LCM和DNA微阵列评估活检标本在预测癌症恶性肿瘤或转移方面非常有用。