哺乳類ポリコーム群による細胞増殖と細胞死制御機序の解明

哺乳动物Polycomb小组阐明细胞增殖和细胞死亡控制机制

基本信息

批准号：
12215017
负责人：
古関明彦
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215017/
关键词：
ポリコーム群クロマチンスプライセオソーム Hox Mel18 Bmi1

项目摘要

ショウジョウバエ・ポリコーム遺伝子群であるMel-18とBmi-1遺伝子産物の機能を分子レベルで明確にしていくことが,本研究の目的であり、それらの作用機序について以下のように解析を行った。(1)HoxクラスターにおけるMel-18結合領域同定の試み。染色体上のMel-18結合領域を明らかにするために、クロマチンDNAとMel-18の複合体の免疫共沈を試みた。パラフォルムアルデヒドを用いて、マウス11.5日胚を固定し、超音波処理によりクロマチンDNA/Mel-18複合体を可溶化した。約1kBの断片として可溶化する条件を明らかにした。セシウム濃度勾配を用いて、フリーのタンパク、クロマチンDNA/タンパク複合体、フリーのクロマチンDNAを分画したところ、Mel-18とBmi-1とBmi-1遺伝子産物は、クロマチンDNA/タンパク複合体の分画にのみ存在することが明らかになった。これとは対照的に、Mel-18とBmi-1のインターラクターであるRing1Bは、クロマチンに結合している分画だけではなく、結合していない分画にも含まれることが明らかになった。Ring1Bも、Hoxクラスタ-の転写制御に寄与することを明らかにしているので、クロマチン結合型のRing1Bが、Mel-18とBmi-1と複合体を構成してポリコーム複合体として機能することが示唆された。Mel-18と免疫共沈されてくるクロマチンDNAに含まれるHoxクラスタ-の頻度をHoxb7/b8/b9に焦点を絞って系統的に検索している。(2)155kDaスプライセオソーム結合タンパク(SAP155)によるポリコーム複合体機能の調節Mel-18とRing1Bのインターラクターとして同定したSAP155は、マウス胚においても構成的にMel-18とRing1Bに結合していることが明らかになった。SAP155を欠損したマウスは、8細胞期におこるコンパクションを維持できず、それ以上に発生は進まない。SAP155とMel-18やMph1二重ヘテロ接合体では、それぞれのヘテロ接合体では観察されないホメオチック変異が中軸骨格系で観察された。また、クロマチン結合分画にもSAP155が見られたことから、一部のSAP155はポリコーム複合体のコンポーネントとしても作用する可能性が示された。

这项研究的目的是阐明MEL-18和BMI-1基因产物的功能，这些基因是分子水平的Shoujo Baie Baie PolyCome Gene组，并分析了它们的机制。（1）尝试识别HOX群集中的MEL-18结合区域。为了阐明染色体上的MEL-18结合区域，我们尝试了染色质DNA和MEL-18的复合物的免疫分离。使用帕拉甲醛固定小鼠11.5天的胚胎，并通过超声处理溶解染色质DNA/MEL-18复合物。已阐明了作为约1KB的片段求解的条件。使用剖以的浓度梯度，自由蛋白，染色质DNA/蛋白质复合物和游离染色质DNA被划分。分区存在。相反，已经揭示了MEL-18和BMI-1的ring1b不仅包含在与染色质的结合中，还包括在不必要的部分中。 RING1B还指出，它有助于HOX群集的转移控制，因此表明染色质型Ring1b构成了MEL-18和BMI-1的复合物，并且可以用作PolyComecompon。染色质DNA中包含的HOX簇的频率集中在HOXB7/B8/B9上，重点是MEL-18。（2）155KDA弹簧ryomo一些被识别为MEL-18的SAP155和RING1B相互作用器也被配置为MEL-18和RING1B在鼠标胚胎中。鼠标缺失的SAP155无法保持在八个单元期间发生的紧凑型，并且不再进展。在SAP155和MEL-18和MPH1双重异质界中，在中央轴骨骼系统中观察到在每个异源中未观察到的房屋。同样，由于在染色质结合绘画中也可以看到SAP155，因此某些SAP155也可以充当PolyCome络合物的组成部分。