集合系マシーナリーのモデル細胞としての高度好熱菌T.thermophilus

嗜热嗜热菌作为集体机器的模型细胞

基本信息

批准号：
11169224
负责人：
倉光成紀
金额：
$ 5.25万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11169224/
关键词：
MutM MutY UvrA UvrB UvrC UvrD MutS MutL 高度好熱菌 Thermus thermophilus HB8 構造生物学構造ゲノム科学ゲノム解析 X線結晶解析 DNA修復系アミノ酸代謝系

项目摘要

高度好熱菌Thermus thermophilus HB8のゲノム解析をほぼ完了した(理化学研究所との共同研究)。その結果によれば,T.thermophilus HB8のゲノムサイズは2Mbpで,約2000個の遺伝子からなり,DNA修復に関与する酵素は約50種類存在することが明らかになった。これまでに,塩基除去修復系のMutM,MutY,EndoV,ヌクレオチド除去修復系のUvrA,UvrB,UvrC,UvrD,組換え修復系のRecA蛋白質,その他,DNA polymerase I,DNA ligase等についての,遺伝子のクローニング・蛋白質の量産化・精製・結晶化を行った。さらに,UvrB,MutM,photolyase,DNA polymerase Iについては,立体構造解析を行った。その中で,UvrA,UvrB,UvrCの他,ミスマッチ修復系のMutS,MutLは,集合系マシーナリーを形成していた。また,酸化傷害修復系のMutMとMutYは,酸化された塩基を修復するための基質特異性が相補し合っていることが示唆された。MutMについては立体構造解析を完了したので,その結果を基にして,酸化傷害DNA基質との反応機構を推定することができた。それを基にして,触媒基と考えられる2つのグルタミン酸やリジン残基を置換した変異型酵素を作製し,傷害DNAを含む基質との反応を解析した結果,より詳細な反応機構が明らかにすることができた。

高度嗜热细菌热嗜热HB8的基因组分析几乎已经完成（与Riken合作）。结果表明，嗜热HB8的基因组大小为2 Mbp，由大约2,000个基因组成，约有50种酶参与DNA修复。到目前为止，已经对蛋白质的基因克隆，质量产生，纯化和结晶进行了基础切除修复系统MUTM，MUTM，MUTY，ENDOV，核苷酸切除修复系统UVRA，UVRB，UVRB，UVRC，UVRD，重组修复系统恢复蛋白，其他，其他，DNA Poligypase I，DNA Poligase I，DNA Ligazase等，等等，等等。 UVRB，MUTM，光解酶和DNA聚合酶I。除了UVRA，UVRB，UVRB，UVRC，MUTS和MUTL外，不匹配修复系统还形成了基于组的机械。还建议，一种氧化损伤修复系统MUTM和MUTY具有修复氧化碱基的互补底物特异性。 MUTM的空间分析完成，并根据结果，可以用氧化受伤的DNA底物估算反应机理。基于此，我们准备了一种突变酶，该突变酶代替了被认为是催化基团的两个谷氨酸和赖氨酸残基，并与含有受伤的DNA的底物分析了反应，并揭示了更详细的反应机制。