集合系マシーナリーのモデル細胞としての高度好熱菌T.thermophilus

嗜热嗜热菌作为集体机器的模型细胞

基本信息

批准号：
13033025
负责人：
倉光成紀
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13033025/
关键词：
UvrA UvrB UvrC UvrD MutS MutL Nudix house-keeping enzyme ヌクレオチド除去修復 β-ドメイン転写共役因子分子機能解析高度好熱菌 Thermus thermophilus HB8

项目摘要

高度好熱菌Thermus thermophilus HB8のDNA修復に関与する酵素は少なくとも50種類存在することが明らかにされているが、その中で、UvrA, UvrB, UvrC, UvrDなどが関与するヌクレオチド除去修復機構は、様々な種類の障害を認識、修復する系として重要である。高度好熱菌のこれら蛋白質を大量発現・精製し、また蛍光色素を傷害として含む基質DNAを用いてUvrABCの傷害ヌクレオチド除去活性の測定した。一方、ミスマッチ修復系にはMutSやMutLが関与するが、MutSと約30%アミノ酸配列が相同なMutS2と呼ばれる機能未知の遺伝子が存在する事が明らかになった。このMutS2を大量発現・精製し、種々の活性を測定したところ、ミスマッチ修復過程において2本鎖・DNAに非特異的に結合することが明らかになり、MutS2がミスマッチ認識以外の機能を持つことが示唆された。また、Nudixタンパク質は、細胞にとって有害な物質や過剰に増加した代謝産物を分解するhydrolaseの総称で、高度好熱菌には計8種類存在するが、これらNudixタンパク質の量産化・精製を行い、構造・機能解析を行った。その他の集合系マシーナリーとして,組換え修復系酵素群,アミノ酸代謝系などの立体構造解析および分子機能解析も行った。

据揭示，嗜热HB8的DNA恢复至少有50种酶，但其中，涉及UVRA，UVRB，UVRC，UVRD等的核苷酸去除恢复机制非常重要。一个识别和修复各种障碍的系统。高质量热细菌的大量蛋白质高度表达和纯化，使用含有荧光染料的底物DNA作为损伤，测量了UVRABC受伤的核苷酸去除活性。另一方面，据揭示了MUTS和MUTL与不匹配的修复系统有关，但是MUTS和MUTS2等于MUTS2，其具有约30％的氨基酸序列。当此MUTS2大量且纯化并测量各种活动时，它会在不匹配修复过程中与两个链条 / DNA无关，而MUTS2具有不匹配识别的功能建议。 nudix蛋白是水解酶的一个通用术语，它分解有害物质并过度吸收的代谢产物，并进行了八种高度高度高度有利的细菌，质量产生和精炼这些Nudix蛋白。作为另一个基于集体的机器，还进行了三维结构分析和分子功能分析，例如恢复可再生酶基团，氨基酸代谢系统和分子功能分析。