gp120のX線結晶構造解析とその立体構造に基づいたHIVの感染メカニズムの解明

gp120的X射线晶体结构分析及基于其三维结构阐明HIV感染机制

基本信息

批准号：
11161213
负责人：
千田俊哉
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161213/
关键词：
HIV 結晶化 X線結晶構造解析 SDF-1α gp120 gp41 温度因子

项目摘要

1)gp120現在までにセンダイウイルスの発現系を使用して発現させたgp120およびgp140(gp120とgp41にプロセスされる前の状態の蛋白質)を用いて結晶化を進めてきてた。その結果微小ではあるがgp120の結晶らしきものを得た。高エネルギー加速器研究機構の放射光実験施設でこの微小な結晶を用いて、回折実験を行ったが、回折パターンを得ることはできなかった。そこで、現在までのアプローチに加え、gp120とgp41の相互作用部位に焦点をあてて、この両者の相互作用を見るために、gp41とgp120のN末端約100残基程度からなる融合蛋白質(gp41-N(gp120))を発現させて、これを構造解析する試みも開始した。現在は、大腸菌を用いてのgp41-N(gp120)の大量発現系の構築を行っている。2)SDF-1αSDF-1αの結晶としては、現在のところ3種類のものが得られている。そのうちの2つに関して立体構造解析を完了した(論文投稿中)。得られた構造から、SDFは、結晶中では2量体を形成していること、ループ部分の運動性が高いことなどが明らかになった。また、温度因子の比較から、高分解能の回折点を与えない結晶では、結晶中の分子間相互作用に関与するアミノ酸の温度因子が極めて高いことを見出した。反対に、高分解能の回折点を与える結晶では、これらの残基は、原子全体の平均の温度因子より低い温度因子を持っていることが明らかになった。これらの知見は、変異体を利用した良質の結晶作成に応用可能であると考えられる。

1) gp120 迄今为止，我们一直在使用仙台病毒表达系统表达的gp120和gp140（加工成gp120和gp41之前的状态的蛋白质）进行结晶。结果，我们获得了看起来像是 gp120 晶体的东西，尽管它们很小。在高能加速器研究组织的同步加速器辐射实验设施中，利用这种微小晶体进行了衍射实验，但未能获得衍射图案。因此，除了目前的方法外，我们还重点关注了gp120和gp41之间的相互作用位点，为了检验两者之间的相互作用，我们创建了一个融合蛋白（gp41-），我们也开始尝试表达N(gp120) )并分析其结构。目前，我们正在利用大肠杆菌构建gp41-N（gp120）的大规模表达系统。 2）SDF-1α 目前，已经获得了三种类型的SDF-1α晶体。其中两个已完成三维结构分析（论文正在提交中）。获得的结构表明SDF在晶体中形成二聚体并且环部分具有高迁移率。此外，通过比较温度因素，我们发现在不提供高分辨率衍射点的晶体中，晶体中参与分子间相互作用的氨基酸的温度因素极高。相反，在产生高分辨率衍射点的晶体中，这些残留物的温度因子低于原子的平均温度因子。这些发现被认为适用于使用突变体生产高质量晶体。