肝特異的転写因子による肝臓幹様細胞(oval cell)の増殖・分化の制御機構

肝脏特异性转录因子调控肝干样细胞（卵圆细胞）增殖和分化的机制

• 批准号: 11139206
• 负责人: 杉山 俊博
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139206/
• 关键词: 肝特異的転写因子; 肝臓幹様細胞; oval cell; HNF-1; レチノイン酸; EGF

要約肝特異的転写因子をトランスフェクションしてアルブミンを発現することが出来るかどうか、in vitro系で検討した。その結果、肝特異的転写因子をトランスフェクションした肝臓幹様細胞SD-SLC/HNF-1は、コラーゲンの2次元培養系ではアルブミンを合成できるようになるが、ここにレチノイン酸やEGFを添加するとアルブミン合成は抑制された。結果1)SD-SLCにHNF-1遺伝子導入して9株の永久株を樹立できた。一方、oval cellは導入後の増殖が悪いために現在のところ永久株は確立できなかった。そこで、本実験では樹立化に成功した3種のSD-SLC/HNF-1株を用いた。2)SD-SLC/HNF-1は2次元細胞培養系でレチノイン酸を添加すると、アルブミン、AFP、HNF-4、γGTPのmRNA発現を減少させたが、一方C/EBPを増加させた。SD-SLC/HNF-1に対するEGFの効果は濃度依存性にアルブミンの発現を抑制した。ところが、コントロールSD-SLCに対してはEGFは最適濃度では発現増加を示した。3)コラーゲンコート上(1次元培養系)でSD-SLC/HNF-1、SD-SLC/vectorのみ、SD-SLCの3種の細胞株を培養したとき、この順番でアルブミンが強く発現した。考察我々の樹立した細胞と従来報告されたoval cellと相違する点は、培養初期からアルブミン合成能がないことや肝細胞転写因子のうちHNF-3βしか発現していないことである。肝特異的転写因子をトランスフェクションしてアルブミンを発現することが出来るかどうか、in vitro系で検討した。その結果、肝特異的転写因子(HNF-1)をトランスフェクションした肝臓幹様細胞SD-SLC/HNF-1は、コラーゲンの2次元培養系ではアルブミンを合成できるようになるが、ここにレチノイン酸やEGFを添加するとアルブミン合成は抑制された。このことは、これらの因子は肝臓幹様細胞を脱分化する働きがあると考えられた。

摘要我们研究了是否可以通过使用体外系统转染肝脏特异性转录因子来表达白蛋白。结果，转染肝脏特异性转录因子的肝干样细胞SD-SLC/HNF-1能够在二维胶原培养系统中合成白蛋白，但是当向该细胞中添加视黄酸或EGF时，它们能够合成白蛋白。结果1)通过将HNF-1基因导入SD-SLC，我们能够建立9个永久菌株。另一方面，由于引入后增殖不良，不可能建立永久的卵圆细胞株。因此，在本实验中，我们使用了成功建立的三种SD-SLC/HNF-1菌株。 2)当在二维细胞培养体系中添加视黄酸时，SD-SLC/HNF-1降低了白蛋白、AFP、HNF-4和γGTP的mRNA表达，但增加了C/EBP。 EGF对SD-SLC/HNF-1的作用是以浓度依赖性方式抑制白蛋白表达。然而，EGF 表达在对照 SD-SLC 的最佳浓度下增加。 3)当SD-SLC/HNF-1、仅SD-SLC/载体和SD-SLC这三种细胞系在胶原蛋白涂层（一维培养系统）上培养时，白蛋白按此顺序强烈表达。讨论 我们建立的细胞与之前报道的卵圆细胞的区别在于，它们从培养早期就缺乏白蛋白合成能力，并且只表达肝细胞转录因子中的HNF-3β。我们研究了是否可以通过使用体外系统转染肝脏特异性转录因子来表达白蛋白。结果，转染肝脏特异性转录因子（HNF-1）的肝干细胞样细胞SD-SLC/HNF-1能够在二维胶原培养系统中合成白蛋白。表皮生长因子或表皮生长因子。这表明这些因子具有使肝干样细胞去分化的功能。

项目成果

Harada M.et al.: "Wilson's disease gene product,ATP7B,localizes in the late endosomes in a human hepatoma cell line and normal rat hepatocytes : Participation in biliary copper"Gastroenterology. (in press). (2000)

Harada M.等人：“威尔逊病基因产物，ATP7B，定位于人肝癌细胞系和正常大鼠肝细胞的晚期内体中：参与胆铜”胃肠病学。

Sugiyama,T.et al.: "Liver stem-like(oval)cells : isolation,differentiation and application for cell therapy. In ikada,Y.and Okano,T.ed. Tissue Engineering for Therapeutic USE"Elsevier Science B.V.. pp.161 (1999)

Sugiyama,T.et al.：“肝脏干细胞样（卵形）细胞：分离、分化和细胞治疗应用。Inikada,Y.and Okano,T.ed.Tissue Engineering for Therapeutic USE”Elsevier Science B.V.. pp

Nagai H.et al.: "Genomic DNA analyses of spontaneous hepatocellular carcinomas in LEC rat liver using a new technique"Oncology Report. 7. 315-318 (2000)

Nagai H.等人：“使用新技术对 LEC 大鼠肝脏中自发性肝细胞癌进行基因组 DNA 分析”肿瘤学报告。

Watanabe I.et al.: "Detection of apoptotic cells in human colorectal by in situ methods : Antibody against single-stranded DNA and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end-labeling(TUNEL) methods. Jpn.J.Cancer Res.90 : 188-193,1

Watanabe I.等人：“通过原位方法检测人结肠直肠中的凋亡细胞：抗单链 DNA 的抗体和末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP-生物素缺口末端标记 (TUNEL) 方法。Jpn.J.Cancer Res