LCMとcDNAマイクロアレイ手法を用いた肝臓幹細胞と肝癌細胞の遺伝子発現

使用 LCM 和 cDNA 微阵列技术研究肝干细胞和肝癌细胞中的基因表达

基本信息

批准号：
04F04226
负责人：
杉山俊博
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F04226/
关键词：
肝細胞 p53 卵形細胞肝臓幹様細胞 HSLC レーザーマイクロダイセクション法

项目摘要

肝臓には胆管と肝細胞の二方向に分化できる肝臓幹細胞が存在しており、当教室ではすでにウィルソン病モデルラットから肝臓前駆細胞である「卵形細胞(oval cell)」や健常ラットから「肝臓幹様細胞(HSLC)」の樹立化に成功した。3'-Me-DABで誘発した肝がん発生過程において、正常・前がん病変・がん部組織をレーザーマイクロダイセクション法にて細胞を採取し、包括的な遺伝子発現変異を解析した。F344ラット肝化学発癌過程におけるGST-P陽性病巣と胆管線維症病変部において、p53 mRNAの発現量がまずはじめに増加し、経時的に徐々に減少した。逆に、p53遺伝子の変異率は経時的に上昇した。一方、p53の蛋白質の蓄積は肝化学発癌過程後期に認められた。LightCycler RT-PCR法によるmRNA発現の定量結果から、GST-Pは初期の前癌病変のマーカーとして有効であることを確認した。肝癌のマーカーであるAFPは、3'-Me-DAB誘発F344ラット肝発癌過程における増殖病変、胆管線維症で強く発現していたことから、胆管線維症は癌化と関係があると考えられた。アルブミンmRNAの発現量は初期の前癌病変でも明らかな減少を認めた。以上、発癌に長期間を要すること、前癌病変が存在することなどから遺伝子変化は一挙におこるのではなく、正常組織から前癌病変を経て癌に進行していく多段階過程で次第に蓄積すると考えられた。肝癌では前癌病変、初期肝癌、進行肝癌といった多段階の発癌過程において遺伝子の異常が注目されている。本研究では肝化学発癌過程における前癌病変の遺伝子の異常を解明するため、3'-Me-DABによるF344ラット化学肝発癌モデルを利用し、p53遺伝子の異常と肝腫瘍マーカーGST-P、AFPおよび肝臓特異的蛋白Albumin遺伝子mRNA発現量と蛋白質の変化を分析した。

肝脏含有可以分化为胆管和肝细胞的肝干细胞，在我们的实验室中，我们已经从威尔逊病模型大鼠中分离出了“卵圆细胞”，即肝脏祖细胞，以及从健康大鼠中分离出的“肝细胞”我们成功地建立了“类干细胞（HSLC）”。在3'-Me-DAB诱导的肝癌发展过程中，利用激光显微切割从正常组织、癌前组织和癌组织中收集细胞，并分析全面的基因表达突变。在F344大鼠肝癌化学癌变过程中GST-P阳性病灶和胆管纤维化病灶中，p53 mRNA的表达水平随着时间的推移最初升高，然后逐渐降低。相反，p53基因的突变率随着时间的推移而增加。另一方面，在肝脏化学致癌过程的后期观察到p53蛋白的积累。使用 LightCycler RT-PCR 方法对 mRNA 表达的定量结果证实，GST-P 作为早期癌前病变的标志物是有效的。 AFP是肝癌标志物，在3'-Me-DAB诱导的F344大鼠肝癌发生过程中的增殖性病变胆管纤维化中强烈表达，表明胆管纤维化与癌变有关。即使在早期癌前病变中也观察到白蛋白 mRNA 表达明显下降。如上所述，由于癌变所需的时间较长，且存在癌前病变，基因的改变并不是一下子发生的，而是在从正常组织发展到癌前病变再到癌症的多步骤过程中逐渐积累。有人这么想。在肝癌中，基因异常在多阶段癌变过程中受到关注，包括癌前病变、早期肝癌和晚期肝癌。在本研究中，我们使用3'-Me-DAB的F344大鼠化学性肝癌模型来阐明肝脏化学性致癌过程中癌前病变的遗传异常，并分析了肝脏特异性蛋白白蛋白的mRNA表达水平和蛋白质变化。基因。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

The Wilson disease protein ATP7B resides in the late endosomes with rab7 and the Niemann-Pick C1 protein

DOI：
10.1016/s0002-9440(10)62272-9
发表时间：
2005-02-01
期刊：
AMERICAN JOURNAL OF PATHOLOGY
影响因子：
6
作者：
Harada, M;Masaru, H;Sata, M
通讯作者：
Sata, M

Restoration of copper metabolism and rescue of hepatic abnormalities in LEC rats, an animal model of Wilson's disease, by expression of human ATP7B gene

通过表达人 ATP7B 基因恢复 LEC 大鼠（威尔逊病动物模型）中的铜代谢并挽救肝脏异常

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Biochim.Biophys.Acta 1690
影响因子：
0
作者：
Lee E-J.;Iai H.;Koizumi N.;Sano H.;Kanzaki-Kato N. et al.;Harada M. et al.;Kameda T. et al.;Yan M.Y.et al.
通讯作者：
Yan M.Y.et al.

Prognostic value of the Cu-transporting ATPase in ovarian carcinoma patients receiving cisplatin-based chemotherapy

DOI：
10.1158/1078-0432.ccr-03-0454
发表时间：
2004-04-15
期刊：
CLINICAL CANCER RESEARCH
影响因子：
11.5
作者：
Nakayama, K;Kanzaki, A;Takebayashi, Y
通讯作者：
Takebayashi, Y

Enhanced proliferation of hepatic progenitor cells in rats after portal branch occlusion

大鼠门静脉支闭塞后肝祖细胞增殖增强

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Liver Transpl. 10
影响因子：
0
作者：
Lee E-J.;Iai H.;Koizumi N.;Sano H.;Kanzaki-Kato N. et al.;Harada M. et al.;Kameda T. et al.;Yan M.Y.et al.;Ise N.et al.
通讯作者：
Ise N.et al.