LECラットにおける肝臓始原細胞株の樹立と肝細胞への分化機構

LEC大鼠肝祖细胞系的建立及向肝细胞的分化机制

基本信息

批准号：
09254203
负责人：
杉山俊博
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09254203/
关键词：
肝癌 oval cell LECラット肝臓始原細胞肝細胞分化肝細胞転写因子

项目摘要

1.目的銅トランスポータであるウィルソン病遺伝子の異常を持つLECラットにおける肝炎後の肝細胞の特徴は、化学発癌過程と同様にoval cellが著明に増生することである。この時期のLECラット肝臓からoval cellを分離・樹立を試みた。さらに、樹立したoval cellを用いて、肝細胞へ最終分化する過程で、この細胞がホメオドメイン蛋白HNF-lα、-3β遺伝子などの肝細胞転写因子の階層的制御により肝細胞へと分化する機構の解明を目的とした。2.方法と結果(1)肝細胞の分化過程において、HNF-3β,HNF-3α,HNF-4,HNF-1α遺伝子はこの順で発現することが知られている。肝細胞転写因子のうち、HNF-3βmRNAのみが発現していたが、他の4つの転写因子はいずれも発現していなかった。(2)我々はすでにHNF-lαのcDNAと抗体を作製しており、肝細胞分化の良いマーカーであることを明らかにしてきた。oval cellにHNF-lαのcDNAを導入した結果、永久株の樹立はできなかった。(3)このoval cellはin vitro三次元コラーゲンゲル培養系でEGFを添加すると管様構造を形成した。一方、前年度でも報告したように、肝臓に移植したoval cellは肝細胞に分化した。

1.目的铜转运蛋白威尔逊病基因异常的LEC大鼠肝炎后肝细胞的一个特征是卵圆细胞明显增殖，类似于化学致癌过程。在此阶段，我们尝试从 LEC 大鼠的肝脏中分离并建立卵圆细胞。此外，在使用建立的卵圆细胞最终分化为肝细胞的过程中，我们通过同源域蛋白HNF-lα和-3β基因等肝细胞转录因子的分层控制来证明这些细胞分化为肝细胞的机制。是为了阐明2.方法和结果(1)已知在肝细胞的分化过程中，HNF-3β、HNF-3α、HNF-4和HNF-1α基因按此顺序表达。肝细胞转录因子中，仅HNF-3β mRNA表达，其他4个转录因子均不表达。 (2)我们已经生成了HNF-1α的cDNA和抗体，并证明它是肝细胞分化的良好标记。由于将HNF-1α cDNA引入卵圆细胞中，无法建立永久系。 (3)当在体外三维胶原凝胶培养系统中添加EGF时，该卵圆细胞形成管状结构。另一方面，正如去年报道的那样，移植到肝脏的卵圆细胞分化为肝细胞。