ラット肝発癌過程に出現するoval cellの肝細胞への分化能

大鼠肝癌发生过程中卵圆细胞分化为肝细胞的能力

基本信息

批准号：
08265203
负责人：
杉山俊博
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08265203/
关键词：
LECラット oval cell 肝臓始原細胞肝細胞分化肝細胞転写因子

项目摘要

【方法と結果】1.銅異常蓄積のために生後3-4か月において劇症肝炎を起こしたLECラット肝臓からコラ-ゲナーゼ灌流法を用いてoval cellを分離できた。2.肝細胞の分化マーカーとして肝細胞特異的転写因子,前癌病巣をγ-GTP,GST-P,AFP,肝細胞と胆管上皮細胞にはalbumin,cytokeratin 18と19の抗体を用いて、免疫組織的・生化学的により検索した。その結果、肝臓始原細胞の細胞源としてより頻度の多いLECラットを用いて、目的の細胞を容易にしかも大量に得た。分離したoval cellは、現在まで1年間以上長期細胞培養が可能であり、また凍結保存できた。細胞染色法から、γ-GTP,GST-P,AFP,cytokeratin 18と19は陽性であったが、albuminは陰性であった。肝細胞転写因子のうち、HNF-3βmRNAのみが発現していたが、他の4つの転写因子、HNF-3α,HNF-1α,HNF-4,C/EBPはいずれも発現していなかった。さらに3.このoval cellを無アルブミンラットに移植したところ、移植した細胞は肝細胞に形態学的にも変化し、また免疫組織学的にもアルブミンの産生が認められた。以上の結果、oval cellは、胆管上皮細胞と肝細胞の両方の性質を発現する多分化能を有している細胞であることが判明した。【考察】LECラットより分離されたoval cellは、肝細胞系と胆管上皮細胞系の両方をあわせ持ち、HNF-3βのみの肝細胞転写因子の発現を認めたことにより、肝臓細胞としては未分化な状態にあると思われた。しかし、肝臓に移植することで、アルブミンの分泌能を持つ細胞に分化しうることが明かにできた。

[方法与结果] 1.采用胶原酶灌注法从3-4月龄因铜异常积累而发生暴发性肝炎的LEC大鼠的肝脏中分离出卵圆细胞。 2.免疫使用肝细胞特异性转录因子作为肝细胞分化标志物，对于癌前病变使用γ-GTP、GST-P和AFP，对于肝细胞和胆管上皮细胞使用白蛋白、细胞角蛋白18和19抗体进行组织学和搜索。生化上。因此，我们能够通过使用 LEC 大鼠轻松获得大量所需细胞，LEC 大鼠更常用作肝祖细胞的来源。到目前为止，分离的卵圆细胞已经能够培养一年多并冷冻。细胞染色显示γ-GTP、GST-P、AFP、细胞角蛋白18和19呈阳性，但白蛋白呈阴性。肝细胞转录因子中，仅HNF-3β mRNA表达，其他4种转录因子HNF-3α、HNF-1α、HNF-4和C/EBP均不表达。此外，3.当这些卵圆细胞被移植到无白蛋白的大鼠体内时，移植的细胞形态改变为肝细胞，并且通过免疫组织化学也观察到白蛋白的产生。上述结果表明卵圆细胞是多能细胞，表现出胆管上皮细胞和肝细胞的特性。 [讨论] 从LEC大鼠中分离的卵圆细胞同时具有肝细胞谱系和胆管上皮细胞谱系，并且由于仅表达肝细胞转录因子HNF-3β，因此未分化为肝细胞，看起来状态很差。然而，当移植到肝脏中时，它们能够分化成能够分泌白蛋白的细胞。