VEGFに結合するマトリックス成分とその分解による活性調節機構

与VEGF结合的基质成分及其降解活性调节机制

基本信息

批准号：
10877231
负责人：
岡田保典
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

軟骨組織は無血管性の特殊に分化した組織である。本研究では、本来血管のない関節軟骨組織において、強力な血管新生因子である血管内皮増殖因子(VEGF)の発現を検討するとともに、VEGFに結合することでその生理活性を調節する分子のクローニングを目指す。また、VEGFと未知の結合分子との複合体をマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)で分解することでVEGF活性の変化を調べる。得られた成果は以下の通りである。(1).慢性関節リウマチと変形性関節症の関節軟骨組織においてVEGF_<121>とVEGF_<165>のmRNA発現が認められ、in situ hybridizationで軟骨破壊の進んだ部位の軟骨細胞が標識された。また、VEGF受容体はKDRとflt-1は陰性であったが、neuropilin-1が検出された。軟骨組織器官培養上清中にVEGF蛋白が検出され、その産生は培養軟骨細胞でも確認された。免疫染色による軟骨細胞のVEGF染色陽性率は、Mankin scoreと有意な相関を示し(n=32,r=0.827,p<0.0001)、軟骨破壊の程度と関連が見られた。(2).VEGFに結合する分子をクローニングするために、VEGF_<165>をbaitとしてGAL4based yeast two hybrid systemにより軟骨細胞cDNAライブラリーをスクリーニングした。陽性を示した162クローンのうち128クローンを部分シークエンスしたところ、既知の分子としてフィブロネクチン、コラーゲン、テネシンなどの細胞外マトリックス分子の他、膜タンパクや種々のサイトカインなどが含まれていた。これらの分子とVEGF_<121>とVEGF_<165>との結合能をプレートアッセイとBlACOREを用いて検討中である。また、VBGF_<165>との複合体での血管内皮細胞の増殖活性、複合体のMMPでの分解と活性変化を検討予定である。

软骨组织是血管，特殊分化的组织。在这项研究中，我们将研究没有血管的关节软骨组织中血管内皮生长因子（VEGF）（VEGF）的表达，这是一种强大的血管生成因子，我们将旨在克隆通过与VEGF结合来调节其生理活性的分子。此外，通过降解VEGF与基质金属蛋白酶（MMP）之间的复合物与未知的结合分子之间的复合物来检查VEGF活性的变化。获得的结果如下：（1）。在类风湿关节炎和骨关节炎的关节软骨组织中观察到VEGF_ <121>和VEGF_ <165>的mRNA表达，在具有晚期软骨破坏的部位的软骨细胞在现场杂交中被标记。此外，尽管KDR和FLT-1对于VEGF受体为阴性，但仍检测到Neuropilin-1。在软骨组织器官培养物的上清液中检测到VEGF蛋白，并且在培养的软骨细胞中也证实了其产生。通过免疫染色的软骨细胞的VEGF染色阳性速率与Mankin评分显着相关（n = 32，r = 0.827，p <0.0001），并且与软骨破坏程度有关。（2）。对于与VEGF结合的克隆分子，使用基于GAL4的酵母两种杂种系统（vegf_ <165>）作为诱饵对软骨细胞cDNA文库进行筛选。在162个阳性克隆中，有128个被测序，已知的分子包括细胞外基质分子，例如纤连蛋白，胶原蛋白和看台，以及膜蛋白和各种细胞因子。这些分子与VEGF_ <121>和VEGF_ <165>的结合能力目前正在使用板盘和Blacore进行研究。我们还将研究具有VBGF_ <165>复合物中血管内皮细胞的增殖活性，以及MMP中复合物活性的降解和变化。