細胞成長因子の作用機構並びにその発がん遺伝子との関連の解析

细胞生长因子作用机制及其与癌基因关系分析

基本信息

批准号：
60218022
负责人：
西塚泰美
金额：
$ 12.16万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞のがん化機構は細胞成長因子の情報伝達機構と密接に関連していることが明らかにされており、がん化機構の理解には正常の情報伝達機構を解明することが必須といえる。私共は細胞増殖や細胞機能の亢進を導く各種の生理活性物質の情報伝達機構において情報増幅の中心的役割を果たしている蛋白質リン酸化酵素、protein kinase Cがホルボールエステル等の発がんプロモーターの受容体として作用していることを明らかにしている。本年度は、昨年度にひき続き、正常の情報伝達機構および細胞のがん化機構におけるprotein kinase Cの機能を解明するために、本酵素に対するモノクロナル抗体の作製と、protein kinase Cの構造解析をおこない以下の成果をおさめた。即ち、protein kinase Cを大量に分離精製する方法を確立し、精製酵素を用いてマウスの免疫をくり返し、モノクロナル抗体の作製をおこない、最終的に3種類のクローンを得た。これらのモノクロナル抗体はprotein kinase Cに特異的に結合することをウェスタンブロッティング法により明らかにした。これらの抗体を用いて免疫組織化学的方法により本酵素の細胞内局在を検討した結果、protein kinase Cの細胞内分布は細胞種により異なるが、細胞質あるいは細胞内顆粒に存在し、細胞核にはほとんど存在しない。従って本酵素から細胞核への情報伝達にはもう一段の過程が存在するものと推定される。また、精製protein kinase Cを用いて本酵素の部分構造を解析し、アミノ酸配列を決定した。その結果、protein kinase Cの遺伝子クローニングをおこなうためのDNAプローブの作製が可能となり現在、DNAライブラリーよりの本酵素の遺伝子クローニングを開始している。今後、当初の計画に従い、本酵素の遺伝子クローニングを続行するとともにモノクロナル抗体を用いて正常の情報伝達機構あるいは細胞がん化機構におけるprotein kinase Cの役割の解析をおこなうことを予定している。

研究表明，细胞的癌变机制与细胞生长因子的信息传递机制密切相关，阐明正常的信息传递机制对于了解癌变机制至关重要。我们发现蛋白激酶C，即在导致细胞增殖和细胞功能增强的各种生理活性物质的信息传递机制中，起放大信息作用的核心作用的蛋白激酶C，是佛波醇等致癌启动子的受体。很明显，它起到了酯的作用。今年，继去年的基础上，我们将生产针对该酶的单克隆抗体，并进行蛋白激酶C的结构分析，以阐明蛋白激酶C在正常信息传递机制和细胞癌变机制中的功能，我们取得了以下成果。。具体来说，他们建立了大量分离和纯化蛋白激酶C的方法，用纯化的酶反复免疫小鼠，产生单克隆抗体，最终获得了三种类型的克隆。蛋白质印迹显示这些单克隆抗体与蛋白激酶 C 特异性结合。使用这些抗体通过免疫组织化学方法检查该酶的细胞内定位，结果发现蛋白激酶C的细胞内分布根据细胞类型而不同，但它存在于细胞质或细胞内颗粒中，并且存在于细胞内。细胞核几乎不存在。因此，推测从这种酶到细胞核的信息传递还存在另一个步骤。另外，使用纯化的蛋白激酶C分析了该酶的部分结构，并确定了氨基酸序列。因此，我们能够创建用于蛋白激酶 C 基因克隆的 DNA 探针，并且我们现在已经开始从 DNA 文库中对该酶进行基因克隆。未来，我们计划按照原计划继续对该酶进行基因克隆，并利用单克隆抗体来分析蛋白激酶C在正常信号转导机制或细胞癌变机制中的作用。