細胞成長因子の作用機構並びにその発がん遺伝子との関連の解析

细胞生长因子作用机制及其与癌基因关系分析

基本信息

批准号：
61210021
负责人：
西塚泰美
金额：
$ 12.16万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

発がん遺伝子の構造解析の結果から、細胞のがん化機構は細胞成長因子の情報伝達と密接に関連していることが明らかにされており、がん化機構の理解には正常の情報伝達機構を解明することが必須といえる。私共は細胞増殖や細胞機能の亢進を導く各種の生理活性物質の情報伝達機構において情報増幅の中心的役割を果たしている蛋白質リン酸化酵素,protein kinase Cがホルボールエステル等の発がんプロモーターの受容体として作用していることを明らかにしている。本年度は、咋年度にひき続き、このprotein kinase Cの構造解析から得られた部分アミノ酸配列を用いて本酵素の遺伝子クローニングを行ない、protein kinase Cの全一次構造を明らかにした。即ち、protein kinase Cの部分アミノ酸配列より、2種類の17オリゴヌクレオチドのプローブを作製し、遺伝子ライブラリーよりこれらのプローブの配列を含むクローンを1種類、単離した。このクローンはprotein kinase CのC末端側の約3分の1の構造を含んでおり、このクローンの5'側のフラグメントをプローブとして用い、最終的にprotein kinase Cの5'側非転写領域までをコードするクローンを得た。protein kinase Cは、その分子構造のC末端側にATP結合領域を含む蛋白質リン酸化酵素に共通の構造を持ち、N末端側にシステインを多く含む酵素活性調節に関連していると考えられる配列を有することが明らかとなった。このprotein kinase Cの構造は、蛋白質リン酸化酵素としての共通構造は有するものの、従来報告されている発がん遺伝子産物との相同性は認められなかった。また遺伝子クローニングの過程において、protein kinase Cには、同一の遺伝子からalternative splicingにより2種類のmRNAが転写されることが明らかとなった。以上の結果より、protein kinase Cの分子構造が明らかとなり、遺伝子工学的手法による本酵素の機能の解析が可能となり、本研究の所期の目的を達成した。

癌基因的结构分析结果表明，细胞的癌变机制与细胞生长因子的信息传递密切相关，阐明这一点至关重要。我们发现蛋白激酶C，即在导致细胞增殖和细胞功能增强的各种生理活性物质的信息传递机制中，起放大信息作用的核心作用的蛋白激酶C，是佛波醇等致癌启动子的受体。很明显，它起到了酯的作用。今年，继崔年之后，我们利用蛋白激酶C结构分析得到的部分氨基酸序列，对该酶进行了基因克隆，阐明了蛋白激酶C的整个一级结构。具体地，从蛋白激酶C的部分氨基酸序列创建两种类型的17-寡核苷酸探针，并从基因文库中分离出一种包含这些探针序列的克隆。该克隆包含蛋白激酶C约三分之一的C端结构。使用该克隆的5'片段作为探针，我们最终探测到了蛋白激酶C的5'非转录区。我们获得了编码的克隆。蛋白激酶C具有与蛋白激酶相同的结构，包括C端侧的ATP结合区和N端侧的被认为与酶活性调节有关的富含半胱氨酸的序列。明确指出尽管蛋白激酶C的结构与蛋白激酶C具有共同的结构，但未观察到与先前报道的致癌基因产物的同源性。此外，在基因克隆过程中，发现蛋白激酶C的两种mRNA是通过选择性剪接从同一基因转录而来。上述结果阐明了蛋白激酶C的分子结构，使得利用基因工程技术分析该酶的功能成为可能，达到了本研究的预期目的。