Protein Kinase Cの構造と機能,並びに細胞増殖の調節

蛋白激酶C的结构和功能以及细胞增殖的调节

基本信息

批准号：
62614524
负责人：
西塚泰美
金额：
$ 12.8万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1989
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62614524/
关键词：
プロテインキナーゼ分子多様性 cDNAクローン EGF受容体

项目摘要

protein kinase Cの機能の解明は, 今日医学生理学の重要課題の一つであり, ことに細胞成長因子との共役による細胞増殖の調節機構に関心が集まっている. 最近, 生化学的および分子生物学的解析により本酵素には分子種多様性が存在することが明らかとなり, protein kinase Cには種々の異なる情報を伝送する多様性が存在することが推測されている. 本研究ではprotein kinase Cの多彩な機能の物質的基盤を明らかにするため, 本酵素の構造解析, 組織特異性および酵素化学性質の検討を行なった. その結果, cDNAの解析から6種のprotein kinase Cの構造を決定し, その共通構造を明らかにした. 同定されたクローン, α, β, γ, δ, ε, ζは異なる遺伝子に由来し, このうちβ種にはスプライスの相違による異なるクローンβI, βIIが存在する. また, 各cDNAを培養細胞中に発現させ, それぞれの分子種をHPLCによる分離の結果, 構造の異なる各分子種のprotein kinasecの単離に成功し, それぞれの分子種の酵素化学的分析を行なう方法を確立した. 一方, 各分子種に対する抗体を用いた組織化学的解析を行なった結果, 少なくともα, βI, βII,γ種のprotein kinase Cについてはそれぞれ特有の分布を示しており, ことにγ種は中枢神経系のみに存在し, α種は全ての臓器, 細胞に発現していることが示された. また, 従来EGF受容体がprotein kinase Cによるリン酸化によりdown-regulationを受けることが知られているが, 本酵素のうちα種がEGF受容体に高い親和性を示すことが明らかとなった. 従って, 多種のprotein kinase Cはそれぞれ存在部位が異なっており, 特有の生体情報を伝達しているものと予想される. 次年度以降は, 本年度に得られたprotein kinase Cの構造, 組織特異性をもとに, 本酵素の標的タンパク質, 膜機能の調節, 遺伝子発現の調節等, protein kinase C各分子種の機能の解析を行なう予定である.

阐明蛋白激酶C的功能是当今医学生理学的重要问题之一，其中通过与细胞生长因子缀合来调节细胞增殖的机制尤其受到关注。近来，生化和分子生物学研究已得到科学分析。揭示了这种酶具有分子种类多样性，推测蛋白激酶C具有传递各种不同信息的多样性，为了阐明这种酶的各种功能的物质基础，对该酶进行了结构分析，我们研究了组织特异性和酶化学性质，通过 cDNA 分析确定了六种蛋白激酶 C 的结构，并阐明了它们的共同结构：α、β、γ、δ、ε 和 δ。来源于不同的基因，其中，β种由于剪接差异而具有不同的克隆βI和βII。此外，每种cDNA在培养细胞中表达，并且通过HPLC分析每种分子类型的分离结果，我们成功地分离了具有不同结构的蛋白激酶c的各个分子种类，并建立了对各个分子种类进行酶化学分析的方法。同时，我们使用针对每个分子种类至少α、βI、βII和γ的抗体进行了组织化学分析。蛋白激酶C的类型具有独特的分布，γ型仅存在于中枢神经系统，α型在所有器官和细胞中表达。已知EGF受体通过蛋白激酶C的磷酸化而下调，但已经清楚该酶的α型对EGF受体表现出高亲和力。各种类型的蛋白激酶C存在于不同的位置。预计将传递独特的生物学信息。从明年开始，我们将研究今年获得的蛋白激酶C的结构和组织特异性，此外，该酶的靶蛋白、膜功能的调节、我们计划分析蛋白激酶C各个分子种类的功能，包括基因表达的调控。