p27CDK阻害蛋白の蛋白分解によるリンパ球増殖調節機構の解析

p27CDK抑制蛋白水解调控淋巴细胞增殖机制分析

基本信息

批准号：
10167229
负责人：
豊島秀男
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10167229/
关键词：
p27CDK阻害蛋白蛋白分解リンパ球細胞分化細胞増殖

项目摘要

研究目的:リンパ球の増殖、アポトーシスの制御には申請者が発見した細胞周期制御因子であるP27CDK阻害蛋白が重要であることが示されている。リンパ球が細胞周期を開始する際にはP27はユビキチン・プロテアソーム蛋白分解系によって分解される。この際、P27のアミノ酸T187番がリン酸化されることが分解の開始シグナルとして重要であり、このリン酸化を行うのはサイクリンE・CDK2である可能性が報告されている。しかるに、細胞周期を停止した細胞がこれを再開するときにはサイクリンE-CDK2の活性は通常存在しない。従って、P27が分解される際のT187番がリン酸化を担うリン酸化酵素がサイクリシE・CDK2以外に存在すると考えられるため、本研究ではその同定を試み、細胞の増殖と分化におけるCDK阻害蛋白の調節機構を明らかにすることを目的とした。研究成果:マウスのIL-3依存性のpro-B細胞であるBAF細胞にBcl-2を強制発現させた細胞株(東京大学谷口維紹先生より供与)においてp27のT187を特異的にリン酸化する酵素を検索した。BAF細胞抽出物より抗CDK2抗体によってサイクリンE・CDK2を含むCDK2活性をimmunodepletionした後にも細胞抽出物中にはp27のT187を特異的にリン酸化する活性が残存していることが明らかになった。このことより、この細胞抽出物中にサイクリンE・CDK2以外のp27のT187に対する特異的なリン酸化酵素が存在することが示唆されたため、現在その分離精製を試みている。

研究目的：淋巴细胞的增殖和凋亡的控制表明，申请人发现的细胞控制因子P27CDK抑制作用很重要。当淋巴细胞开始细胞周期时，p27被泛素蛋白质分解而分解。目前，据报道，p27的p27 T187是由磷磷酸化的，这对于分解的开始信号很重要，据报道，这种磷酸化可以由Cycline E. CDK2进行。但是，当停止细胞周期的细胞恢复此细胞时，细胞周期蛋白E-CDK2的活性通常不存在。因此，当p27分解时，T187是磷酸化的磷酸化酶以外是循环的，因此在这项研究中，我们将尝试鉴定细胞增殖和差异化的CDK抑制蛋白目的是阐明调整机制。研究结果：具体来说，p27的T187在细胞库存中特异性氧化（由Taniguchi Taniguchi-sensei教授提供），该细胞中强迫在BAF细胞中表达Bcl-2，这是小鼠IL-3依赖性的Pro-B细胞。已经表明，即使通过抗-CDK2抗体，BAF细胞提取物具有在CDK2活性（包括Cyclin e / cdk2）后，P27 T187在细胞提取物中具有特异性磷酸化的活性。现在，这是一个尝试分离和完善的尝试，因为该细胞提取物具有除细胞周期蛋白E / CDK2以外的T187的特定磷酸化酶。