変異ヒトG-CSFレセプタートランスジェニックマウスを用いた白血病発症機構の研究

利用突变型人G-CSF受体转基因小鼠研究白血病发生机制

基本信息

批准号：
10152211
负责人：
中畑龍俊
金额：
$ 1.86万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

wild typeおよびC末端を欠失した変異G-CSF受容体(G-CSFR)を発現するトランスジェニックマウス(Tgマウス)を作製し、G-CSFRを介する刺激による造血幹細胞の増殖・分化過程、2種類のG-CSFRからの細胞内シグナル伝達の違いを明らかにし、白血病発症との関係を解析することを目的として行われた。本年度、H2-Ldプロモーター下流にwild typeヒトG-CSFR cDNAをつないだコンストラクトを作成し、型のごとくTgマウスを作成し、2系統のTgマウスが得られその解析を行った。リッターメイト骨髄細胞はG-CSF存在下で、好中球と少数のマクロファージのみの増殖を示したが、Tgマウス骨髄細胞をG-CSF存在下で培養すると、好中球、マクロファージばかりでなく好酸球、巨核球、肥満細胞、芽球など様々な細胞の増殖・分化・成熟が見られた。以上のG-CSFの作用はclone-sortingした細胞の培養でも確認され、G-CSFの直接作用であることが明らかとなった。さらに、ヒトG-CSF存在下で形成された芽球コロニーの再培養では、再びさまざまな血球系のコロニーが形成された。また、TgマウスへのG-CSFのin vivo投与により好中球、単球のみならず血小板の著明な増加が観察された。G-CSFのような血球系列特異的と考えられているサイトカインであっても、受容体さえ発現していれば、好中球以外の血球系列にも作用し、細胞の増殖・分化・成熟がもたらされることを考えると、血球分化におけるサイトカイン受容体シグナルの特異性は極めて低いように思われる。現在、Kostmann症候群患者で見られるG-CSFR遺伝子のmutationを持ち、C末端を欠失した2種類の変異G-CSFR-Tgマウスを作成中である。このTgマウスが作成されたら、wild typeおよび変異G-CSFR-TgマウスへのG-CSF投与により、白血病、MDSが惹起されるか否か検討する予定である。

我们创建了表达野生型和缺乏C末端的突变型G-CSFR（G-CSFR）的转基因小鼠（Tg小鼠），并研究了G-CSFR刺激的造血干细胞的增殖和分化过程。阐明不同类型G-CSFR细胞内信号转导的差异，并分析其与白血病发生发展的关系。今年，我们创建了一个将野生型人G-CSFR cDNA连接到H2-Ld启动子下游的构建体，照常生成Tg小鼠，并获得并分析了两种Tg小鼠品系。同窝骨髓细胞在G-CSF存在下仅显示中性粒细胞和少量巨噬细胞增殖，但当Tg小鼠骨髓细胞在G-CSF存在下培养时，不仅中性粒细胞和巨噬细胞增殖，而且中性粒细胞也增殖。观察酸性细胞、巨核细胞、肥大细胞、胚细胞等各种细胞的增殖、分化和成熟。 G-CSF的上述作用也在克隆分选细胞的培养物中得到证实，并且清楚它们是G-CSF的直接作用。此外，当重新培养在人G-CSF存在下形成的母细胞集落时，再次形成各种血细胞谱系的集落。此外，通过对Tg小鼠体内给予G-CSF，不仅观察到中性粒细胞和单核细胞的显着增加，而且还观察到血小板的显着增加。即使是细胞因子，如 G-CSF，被认为是血细胞谱系特异性的，只要受体表达，也可以作用于中性粒细胞以外的血细胞谱系，并促进细胞增殖、分化和成熟。血细胞分化中细胞因子受体信号的特异性似乎极低。目前，我们正在创建两种类型的突变型 G-CSFR-Tg 小鼠，它们的 G-CSFR 基因在科斯特曼综合征患者中发现有突变，且 C 末端被删除。一旦创建了这些 Tg 小鼠，我们计划检查向野生型和突变型 G-CSFR-Tg 小鼠施用 G-CSF 是否会诱导白血病和 MDS。