トロンボポエチンの受容体(C-Mpl)との親和性と血小板造血調節機構

血小板生成素与受体（C-Mpl）的亲和力及血小板造血调节机制

• 批准号: 08671208
• 负责人: 佐藤 武幸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671208/
• 关键词: トロンボポエチン; 結合親和性; C-Mpl; 受容体; 調節; 巨核球; サイトカイン; フォルボールエステル

トロンボポエチン(TPO,C-Mplリガンド)は、巨核球および血小板造血の重要な役割をc-Mplリセプターの活性化を通じて果たしていると考えられている。我々は、我々が樹立した巨核球系細胞株CMKを用い、TPO(米国ジェネンテック社より供与)等のサイトカインおよびDMSO,フォルボールエステルのTPO結合への効果を、^<125>l-TPO(米国ジェネンテック社より供与)を用い検討した。結合試験は至適の条件である、15℃2時間にて行った。CMKを種々の濃度のTPOで前処理し、洗浄後細胞表面に結合したTPOを除去するために更に3時間TPOの含まない培地で培養し(この操作で90%以上のTPOが細胞表面より除かれる)、その後_<125>l-TPOの結合を調べたところ、処理量に従って_<125>l-TPOの結合は減少した(平均70%)。TPOによる阻害は前処理30分後にはすでに認められ、3時間後には最大に達した。Scatchard解析により、これは親和性の低下ではなく受容体数の減少と判明した。この減少は正常骨髄巨核球においても認められた。TPOによる阻害はCMKにおいてほとんどの蛋白質合成が阻害される濃度のサイクロヘキシミドにより阻害されなかった。lL-3,lL-6およびDMSO(いずれもCMKを分化させる)の前処置では、_<125>l-TPOの結合は阻害されなかったが、フォルボールエステル(プロテインキナーゼC活性物質)前処置により強く阻害された。この阻害も受容体数の減少であり、サイクロヘキシミドにより阻害されなかった。TPOおよびプロテインキナーゼCによる阻害は今後の興味ある研究課題であり、正常または病気時の血小板造血についての研究に寄与すると思われる。

据认为，血栓蛋白（TPO，C-MPL配体）通过激活C-MPL受体在巨核细胞和血小板造血作用中起着重要作用。我们使用了我们建立并研究了诸如TPO（美国Genentech，美国捐赠）以及使用 ^<125> l-TPO（由Genentech，美国Genentech捐赠）的细胞因子（由Genentech，美国捐赠），DMSO和Phorbol酯对TPO结合的细胞因子（由Genentech捐赠）等细胞因子的影响的巨型细胞细胞系CMK。结合测试在15°C下进行2小时，这是最佳条件。用各种浓度的TPO预处理CMK，并在无TPO培养基中培养3小时，以去除洗涤后的任何TPO（在此过程中，从细胞表面取出90％以上的TPO），然后根据_ <125> L-TPO的结合（通过_ <125> <125> l-tpo）的结合（通过_ <125> l-tpo的结合（<125> l-tpo）。 TPO的抑制作用已经在预处理30分钟后发现，并在3小时时达到了最大值。 Scatchard分析表明，这是受体计数的减少，而不是亲和力的降低。在正常的髓样巨核细胞中也观察到了这种减少。在CMK中抑制大多数蛋白质合成的浓度下，环己酰亚胺在CMK中抑制不受TPO的抑制作用。用LL-3，LL-6和DMSO预处理（都区分CMK）未抑制_ <125> L-TPO的结合，但通过用phorbol酯（蛋白激酶C活性剂）预处理会严重抑制。这种抑制作用也减少了受体的数量，并且没有被环己酰亚胺抑制。 TPO和蛋白激酶C的抑制作用是未来感兴趣的话题，并且很可能在正常或疾病期间有助于研究血小板造血。

项目成果

Yokoe H.Sato T.et al.: "Induction of polyploidization in the human erythreleukenia cell line(HEL) by the protein kinase inhibibotal (K21-2a) and the phorborester-TPA" Leuk,Lymph,. (in press).

Yokoe H.Sato T.等人：“通过蛋白激酶抑制剂 (K21-2a) 和 phorborester-TPA 在人红白血病细胞系 (HEL) 中诱导多倍化”Leuk，Lymph，。