トロンボポエチンの受容体(C-Mpl)との親和性と血小板造血調節機構

血小板生成素与受体（C-Mpl）的亲和力及血小板造血调节机制

• 批准号: 08671208
• 负责人: 佐藤 武幸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671208/
• 关键词: トロンボポエチン; 結合親和性; C-Mpl; 受容体; 調節; 巨核球; サイトカイン; フォルボールエステル

トロンボポエチン(TPO,C-Mplリガンド)は、巨核球および血小板造血の重要な役割をc-Mplリセプターの活性化を通じて果たしていると考えられている。我々は、我々が樹立した巨核球系細胞株CMKを用い、TPO(米国ジェネンテック社より供与)等のサイトカインおよびDMSO,フォルボールエステルのTPO結合への効果を、^<125>l-TPO(米国ジェネンテック社より供与)を用い検討した。結合試験は至適の条件である、15℃2時間にて行った。CMKを種々の濃度のTPOで前処理し、洗浄後細胞表面に結合したTPOを除去するために更に3時間TPOの含まない培地で培養し(この操作で90%以上のTPOが細胞表面より除かれる)、その後_<125>l-TPOの結合を調べたところ、処理量に従って_<125>l-TPOの結合は減少した(平均70%)。TPOによる阻害は前処理30分後にはすでに認められ、3時間後には最大に達した。Scatchard解析により、これは親和性の低下ではなく受容体数の減少と判明した。この減少は正常骨髄巨核球においても認められた。TPOによる阻害はCMKにおいてほとんどの蛋白質合成が阻害される濃度のサイクロヘキシミドにより阻害されなかった。lL-3,lL-6およびDMSO(いずれもCMKを分化させる)の前処置では、_<125>l-TPOの結合は阻害されなかったが、フォルボールエステル(プロテインキナーゼC活性物質)前処置により強く阻害された。この阻害も受容体数の減少であり、サイクロヘキシミドにより阻害されなかった。TPOおよびプロテインキナーゼCによる阻害は今後の興味ある研究課題であり、正常または病気時の血小板造血についての研究に寄与すると思われる。

血小板生成素（TPO，一种 C-Mpl 配体）被认为通过激活 c-Mpl 受体在巨核细胞和血小板造血中发挥重要作用。我们使用我们建立的巨核细胞系CMK，研究TPO（美国Genentech公司捐赠）和DMSO、佛波酯等细胞因子对TPO结合的影响。研究使用以下软件（Genentech公司提供）进行。 。结合测试在15℃下进行2小时，这是最佳条件。 CMKs用不同浓度的TPO进行预处理，洗涤后，在不含TPO的培养基中再孵育3小时，以去除与细胞表面结合的TPO（该过程去除了细胞表面90％以上的TPO）。之后，研究_ 125 I-TPO的结合，并且_ 125 I-TPO的结合根据处理量而减少(平均70％)。预处理后 30 分钟即可观察到 TPO 的抑制作用，并在 3 小时后达到最大值。斯卡查德分析表明，这是由于受体数量减少而不是亲和力下降所致。在正常骨髓巨核细胞中也观察到这种减少。在抑制 CMK 中大部分蛋白质合成的浓度下，放线菌酮不会抑制 TPO 的抑制作用。用lL-3、lL-6和DMSO（所有这些都区分CMK）预处理不会抑制l-TPO结合，但用佛波酯（蛋白激酶C活性物质）预处理会强烈抑制。这种抑制也是受体数量的减少，并且不受放线菌酮抑制。 TPO和蛋白激酶C的抑制将是未来一个有趣的研究课题，并将有助于正常和疾病状态下血小板造血的研究。

项目成果

Yokoe H.Sato T.et al.: "Induction of polyploidization in the human erythreleukenia cell line(HEL) by the protein kinase inhibibotal (K21-2a) and the phorborester-TPA" Leuk,Lymph,. (in press).

Yokoe H.Sato T.等人：“通过蛋白激酶抑制剂 (K21-2a) 和 phorborester-TPA 在人红白血病细胞系 (HEL) 中诱导多倍化”Leuk，Lymph，。