白血病診断用独自作製DNAチップを用いた新規遺伝子の機能スクリーニング

使用专有 DNA 芯片对新基因进行功能筛选，用于白血病诊断

基本信息

批准号：
13877157
负责人：
佐藤武幸
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877157/
关键词：
DNAチップ白血病造血幹細胞

项目摘要

我々は、ALLとAMLを識別する50の遺伝子(Science 286:531-537,1999)を含み、さらに種々の細胞表面抗原遺伝子、薬剤耐性遺伝子、癌遺伝子・癌抑制遺伝子、白血病細胞内薬剤代謝関連遺伝子(薬剤の活性化および不活化)、転写因子関連遺伝子、シグナル伝達系関連遺伝子、接着因子関連遺伝子、アポトーシス関連遺伝子、ホメオボックス関連遺伝子、Polycomb・Trithrax関連遺伝子および種々の機能不明の新規遺伝子を加えたDNAチップを独自作製し、白血病患者10名の初発時白血病細胞、血球系細胞株CMK,CMSについて遺伝子発現を検討した。CMK,CMS細胞は共に巨核球系細胞株であるが、前者は分化型であり後者は未分化型である。両者の比較により、proteoglycan-1,annexin V,vimentin等合計11種の遺伝子が分化関連遺伝子としてスクリーニングされ、検討をすすめている。初発時白血病細胞は、頻回の検討を可能にするため、T7プロモーターを利用した系によりRNAを増幅した。ALLとAMLを識別する50の遺伝子以外にも、発現に差のある遺伝子がスクリーニングされており、リンパ系と骨髄系の分化との関連で検討をすすめている。造血幹細胞とし、CD34陽性かつCD38陰性細胞は、CD34陽性かつCD38陽性細胞と比しより未分化とされている。臍帯血よりMACS社の磁気ビーズを用い両者を分離し、増幅後両者の発現を検討し、複数の遺伝子をスクリーニングした。現在分化との関連で、これら遺伝子の機能を検討中である。

我们已经鉴定出 50 个区分 ALL 和 AML 的基因（Science 286:531-537, 1999)，以及各种细胞表面抗原基因、耐药基因、癌基因/抑癌基因、白血病细胞内药物代谢相关基因(药物激活和失活)、转录因子相关基因。、信号转导系统相关基因、粘附因子相关基因、细胞凋亡我们创建了包含顺式相关基因、同源盒相关基因、Polycomb/Trithrax相关基因以及各种功能未知的新基因的独特DNA芯片，并利用该DNA芯片收集有关白血病细胞和血细胞系CMK和CMS的信息对 10 名白血病患者初次发病时的基因表达进行了检查。 CMK和CMS细胞都是巨核细胞系，但前者是分化型，后者是未分化型。通过比较两者，总共筛选出蛋白多糖1、膜联蛋白V、波形蛋白等11个基因作为分化相关基因，研究正在进行中。使用使用 T7 启动子的系统从原代白血病细胞中扩增 RNA，以便进行重复研究。除了区分 ALL 和 AML 的 50 个基因外，还筛选了差异表达基因，并正在研究与淋巴和骨髓分化的关系。 CD34阳性和CD38阴性细胞被认为是造血干细胞，并且被认为比CD34阳性和CD38阳性细胞更未分化。使用MACS磁珠从脐带血中分离两者，扩增后检查两者的表达并筛选多个基因。我们目前正在研究这些基因与分化相关的功能。