HTLV-I感染T細胞で高発現しているp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の解析

HTLV-I 感染的 T 细胞中高表达的 p21^<Waf1/Cip1/SdiI> 分析

基本信息

批准号：
08670355
负责人：
赤城剛
金额：
$ 1.47万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670355/
关键词：
HTLV-I Tax1 Cell cvcle Cdk Cyclin p21^<Waf1 Cip1 SdiI>p53 細胞不死化

项目摘要

HTLV-I感染T細胞株はcdk inhibitorのp21^<Waf1/Cip1/SdiI>を高レベルで発現していながら細胞増殖を維持することができる。この増殖メカニズムの解明を最終目的として、以下のような検討を行った。(1)p21^<Waf1/Cip1/SdiI>の発現誘導に伴って細胞周期停止が引き起こされるHL-60の分化誘導系とHTLV-I感染T細胞との比較を行った。実際には、分化誘導後のHL-60(TPA10ng/ml処理24hr後)とMT-2との間で、p21^<Waf1/Cip1/SdiI>,Cdc2,Cdk2,Cdk4,Cdk5,Cdk6,Cyclin A,Cyclin B,Cyclin E各タンパクの発現量を比較した。両者の間でp21Waf1/Cip1/SdiI,Cdc2,Cdk2,Cdk4,Cdk5,Cyclin A,Cyclin B,Cyclin Eの量には大差なかったが、Cdk6のみは、HL-60では分化に伴い有意に低下し、MT-2よりかなり低いレベルになっていた。このCdk6の違いが何らかの意味を持つ事が示唆されたが、タンパク量の変化のみでなくkinase活性の変化を見るなど、さらなる検討が必要であると思われる。(2)HTLV-Iのトランスアクティベータ-であるTax1がp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の細胞周期進行停止活性をダイレクトに打ち消している可能性を検討する目的で、p21^<Waf1/Cip1/SdiI>の発現ベクターとTax1の発現ベクターをNIH3T3細胞、およびMOLT-4細胞にco-transfectionしてコロニー形成能の変化を見た。p21^<Waf1/Cip1/SdiI>の導入によりコロニー形成は約1/10に低下したが、これはTax1を共発現させても変化せず、またコロニーを形成した細胞中でのp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の発現レベルもTax1の有無で違いがなかった。このことより、Tax1がp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の細胞周期進行停止活性をダイレクトに打ち消している可能性は低いものと考えられた。(3)HTLV-I感染T細胞株およびTax1のみで不死化したT細胞で観察されるp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の高レベル発現へのp53の関与の可能性を検討した。HTLV-I感染T細胞株およびTax1不死化T細胞は野生型p53を正常T細胞と比較して高いレベルで発現していたが、そのトランスアクティベーション機能には著しい低下が認められ、p53の発現上昇がそのままp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の高レベル発現の原因になっているとは考えにくいと思われた。

HTLV-I感染的T细胞系可以维持细胞增殖，同时表达高水平的CDK抑制剂P21^<WAF1/CIP1/SDII>。进行了以下研究，以阐明这种增殖机制的最终目的。（1）我们比较了HL-60分化诱导系统，该系统导致细胞周期停滞以及诱导P21^<WAF1/CIP1/SDII>表达，并与HTLV-I感染的T细胞进行了诱导。实际上，蛋白质的表达水平p21^<WAF1/CIP1/SDII>，CDC2，CDK2，CDK4，CDK4，CDK5，CDK5，CDK6，Cyclin A，Cyclin a，Cyclin b，Cyclin b，Cyclin b，Cyclin e在诱导后HL-60之间进行了诱导后的HL-60（TPA 10 ng/ml治疗后24 hr）和MT治疗后（24 HR）和MT。 p21WAF1/CIP1/SDII，CDC2，CDK2，CDK4，CDK4，CDK5，Cyclin A，Cyclin A，Cyclin B和Cyclin E的量没有太大差异，但只有CDK6显着降低了HL-60的HL-60显着降低，与MT-2的水平明显低于MT-2。有人提出，CDK6中的这种差异具有一定的含义，但是可能需要进一步考虑，例如不仅改变蛋白质含量，而且改变了激酶活性。（2）为了调查HTLV-I的反式激活者Tax1直接抵消P21^<WAF1/CIP1/SDII>的细胞周期进程停滞活性的可能性，我们将p21^<WAF1/CIP1/CIP1/CIP1/SDII> COLONY cOLORY中的p21^<Waf1/colony colony colony colony的表达向量与NIH3T3和MOLTROYS中的形式进行了转化。 p21^<WAF1/CIP1/SDII>将菌落的形成降低至约1/10，但即使税收1被共表达，这也不会改变，并且在集群形成细胞中p21^<WAF1/CIP1/SDII>的表达水平也不差异，这也没有差异。这表明税务1不可能直接抵消p21^<WAF1/CIP1/SDII>的细胞周期进程停滞活性。（3）我们研究了p53参与p21^<waf1/cip1/sdii>在HTLV-I感染的T细胞系中观察到的p21^<WAF1/CIP1/SDII>的可能性，并且仅通过税收1使T细胞永生1。尽管与正常T细胞相比，HTLV-I感染的T细胞系和税收1脱脂的T细胞在更高水平上表达了野生型p53，但其反式激活功能的显着降低，并且不可能直接表达p53的表达直接导致P21^<waf1/cip1/cip1/sdii>的高度表达。